ערכת ForeDirect RT-qPCR
תיאור ערכה:
◮עבור RNA ישיר הגברה בזמן אמת מאוספים של ספוגיות ללא תהליכי טיהור RNA.ערכה זו משלימה את מחזורי ה-qRT-PCR תוך שעה אחת.תערובת האנזים היא תערובת אופטימלית של Reverse Transcriptase, Hot-Start Taq DNA פולימראז, מעכב RNase.מאגר התגובה מכיל את כל הרכיבים הנדרשים, כולל רכיבי חיץ אופטימליים, Mg2+, dUTP ו-dNTPs.
תיאור
ערכת ForeDirect RT-qPCR מיועדת להגברה ישירה של RNA בזמן אמת מאוספי ספוגית ללא תהליכי טיהור RNA.ערכה זו משלימה את מחזורי ה-qRT-PCR תוך שעה אחת.תערובת האנזים היא תערובת אופטימלית של Reverse Transcriptase, Hot-Start Taq DNA פולימראז, מעכב RNase.מאגר התגובה מכיל את כל הרכיבים הנדרשים, כולל רכיבי חיץ אופטימליים, Mg2+, dUTP ו-dNTPs.
מפרטים
100T
רכיבי ערכה
| חומר לשחרור חומצות גרעין |
| מגן RNA |
| 2× מאגר RT-qPCR |
| תערובת אנזים (Taq&M-MLV) |
| הוראות |
יישום PCR
1. לאחר שצינורות התגובה של PCR עברו צנטריפוגה קצרה, הנח אותם במיכל הדגימה של מכשיר ההגברה.
2. פרוטוקול תרמי
| שלב | טֶמפֶּרָטוּרָה | זְמַן | מחזורים | |
| 1 | תמלול הפוך | 50℃ | 15 דקות | 1 |
| 2 | טרום דנטורציה | 95℃ | דקה 1 | 1 |
| 3 | דנטורציה | 95℃ | 10 שניות | 42 |
| 4 | חישול/הרחבה | 60℃ | 30 שניות | |
הערה:אות פלורסנט זוהה מיד לאחר שלב ההרחבה של כל מחזור.
3. לאחר ההגדרה, שמור את הקובץ והפעל את תוכנית התגובה.
שלבי הפעלה
לפני הכנת הריאגנטים, יש להפשיר את כל הריאגנטים בערכה בטמפרטורת החדר ולערבב בעדינות.
הכנת ריאגנטים
1. הכן את תערובת שחרור חומצת הגרעין
| רְכִיב | עוצמת קול לכל דגימה או שליטה |
| חומר לשחרור חומצות גרעין | 5μL |
| מגן RNA | 0.5 μL |
2. הכן את תערובת התגובה
| רְכִיב | עוצמת קול לכל דגימה או שליטה |
| 2× מאגר RT-qPCR | 15 μL |
| תערובת אנזים (Taq&M-MLV) | 1.5 μL |
| פריימרים ופרובס | 1μL |
אחסון וחיי מדף
-יש לאחסן את הערכה ב-20-± 5℃.תקופת התוקף היא 12 חודשים.
-הימנע ממחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים ונשנים (<5 מחזורים).
