ערכת ישיר RT-qPCR
תיאור
ערכת Direct RT-qPCR מספקת חיץ RT-qPCR ארוז בנפרד ואנזים יעיל גבוהתערובת (Taq、M-MLV、RI), מה שהופך אותו נוח ליצירת ערכות ומערכת אחוריהתאמה, תוך אימות פשוט.
מפרטים
500T, 50,000T
רכיבי ערכה
תכולת ערכה (מערכת תגובה של 20 μL) | IM-05111-01 | IM-05112-01 |
500 T | 50,000 T | |
תערובת אנזים ישירה | 500 μL×1 | 50 מ"ל×1 |
2× מאגר RT-qPCR ישיר | 1 מ"ל×5 | 500 מ"ל×1 |
הוראה | 1 | 1 |
שלבי הפעלה
לפני הכנת הריאגנטים, יש להפשיר את כל הריאגנטים בערכה בטמפרטורת החדר ולערבב בעדינות.
A: הכן of תבנית ו מֵגִיב
1. הכן תבנית RNA מוכנה (מומלץ להשתמש בערכת Foregene Total RNA Isolation Kit לחילוץ ולטהר תבנית RNA) או מוצר לפיצוח דגימה (מומלץ להשתמש במערכת Foregene Lysis), פריימרים ספציפיים (10 מיקרומטר) וחומרים מתכלים רלוונטיים אחרים, מכשיר.
2. הכנס את מאגר 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O ו-20× ROX Reference Dye (אם זה'יש צורך) בקופסה עם קרח, מה שגורם לאלה להימס באופן טבעי ולערבב בעדינות.
B: הכן of RT-qPCR מערכת
שולחן 1 : הכן of RT-qPCR sמערכת
רְכִיב | כרך | ריכוז סופי |
2× מאגר RT-qPCR ישיר | 10 μL | 1× |
תערובת אנזים ישירה | 1μL | |
פריימר קדימה (10 מיקרומטר) | 0.8 μL | 50-900nM |
פריימר הפוך (10 מיקרומטר) | 0.8 μL | 50-900nM |
בדיקה (4 מיקרומטר) | 1μL | 200 ננומטר |
תבנית (RNA או Lysate) | X μL | |
20×ROX Reference Dye | - | 1* |
RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
נפח כולל | 20μL |
C: מַעֲרֶכֶת ה RT-qPCR תְגוּבָה תכנית
שולחן 2 : RT-qPCR reaction תכנית הגדרה (ל דוגמא: שתיים-שלב שיטה)
שלב | טֶמפֶּרָטוּרָה | זְמַן | מחזורים | תוֹכֶן | |
1 | 50℃ | 15 דקות | 1* | 1 | תמלול הפוך |
2 | 95℃ | דקה 1 | 1 | טרום דנטורציה | |
3 | 95℃ | 10 שניות | 40-45 | דנטורציה | |
60℃ | 30 שניות 2* | חישול/הרחבה |
אחסון וחיי מדף
-יש לאחסן את הערכה ב-20-± 5℃.תקופת התוקף היא 12 חודשים.
-הימנע ממחזורי הקפאה-הפשרה חוזרים ונשנים (<5 מחזורים).