Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (ללא כלי דגימה) פרוטוקול
תיאור ערכה:
השתמש ישירות בליסאט רקמת בעלי חיים כתבנית להגברת PCR, ללא מיצוי נפרד של DNA, רגישות מהירה וגבוהה.נוספה מערכת נגד זיהום UNG כדי לחסל תוצאות חיוביות כוזבות.
◮לא נדרש טיהור DNA שגוזל זמן ויקר.
◮הביקוש לדוגמא קטן, פשוט קח זרע בודד.
◮אין צורך בטיפולים מיוחדים כמו גריסה וריסוק והתפעול פשוט.
◮מערכת ה-PCR האופטימלית מאפשרת ל-PCR סגוליות גבוהה יותר וסבילות חזקה יותר למעכבי תגובת PCR.
תיאורים
ערכה זו משתמשת במערכת חיץ תמוגה ייחודית כדי לשחרר במהירות DNA גנומי מדגימות רקמה של בעלי חיים לתגובות PCR, כך שהיא מתאימה במיוחד לבדיקות גנטיות בקנה מידה גדול.
תהליך שחרור ה-DNA הגנומי ממאגר התמוגה מסתיים תוך 10-30 דקות ב-65 מעלות צלזיוס.אין צורך בתהליכים אחרים כגון הסרת חלבון ו-RNA, וניתן להשתמש ב-DNA העקבות המשוחרר כתבנית לתגובת PCR.
2×PCR קלTMמיקס (UNG) משתמש ב-dUTP במקום dTTP על בסיס 2×PCR EasyTMמערבבים ומוסיפים אנזים UNG (Uracil-N-glycosylase) שיכול לפרק את התבנית המכילה dUTP בו-זמנית.לפני תגובת ה-PCR, נעשה שימוש באנזים UNG לפירוק תוצר ה-PCR המכיל אורציל.לאנזים UNG לא תהיה כל השפעה על התבנית שאינה מכילה אורציל, ובכך יבטיח את הספציפיות והדיוק של ההגברה וימנע את האפשרות של זיהום מוצרי PCR במהלך בדיקות גנטיות בקנה מידה גדול.
D-Taq DNA פולימראז הוא פולימראז DNA שפותח במיוחד על ידי Foregene לתגובות PCR ישירות.ל-D-Taq DNA פולימראז יש סבילות חזקה למגוון מעכבי תגובת PCR, והוא יכול להגביר ביעילות כמויות עקבות של DNA במערכות תגובה מורכבות שונות, ומהירות ההגברה יכולה להגיע ל-2Kb/min, מה שמתאים במיוחד לתגובת PCR ישירה.
רכיבי ערכה
| חלק א' | Buffer AL |
| Foregene Protease | |
| 6× מאגר טעינת DNA | |
| חלק שני | 2×PCR קלTMמיקס (UNG) |
תכונות ויתרונות
■ללא טיהור DNA שגוזל זמן ויקר
■ הביקוש לדגימה קטן, ניתן לבדוק רק 5 מ"ג של רקמה של בעלי חיים.
■ אין צורך בטיפול מיוחד כמו טחינה וריסוק והתפעול פשוט.
■ מערכת PCR אופטימלית גורמת ל-PCR סגוליות גבוהה יותר וסובלנות חזקה יותר למעכבי תגובה PCR.
■ מערכת PCR נגד זיהום 2×PCR קלTMמיקס (UNG) מבטל ביעילות את הזיהום הנגרם על ידי מוצרי PCR ומבטיח את הספציפיות והדיוק של ההגברה.
פרמטרים של ערכה
יישום: מגוון רקמות של בעלי חיים.
DNA ששוחרר מתמוגגת דגימה: משמש רק כתבנית PCR.
ניתן להשתמש בערכה למטרות הבאות: זיהוי טרנסגנוזיס, גנוטיפ של בעלי חיים וכו'.
זרימת עבודה
אחסון וחיי מדף
יש לאחסן את חלק I של ערכה זו ב-2-8℃.
ניתן לאחסן את המגיב Buffer AL במשך 12 חודשים בתנאים יבשים;זה יכול להיות מאוחסן ב 2-8℃לאחסון ארוך יותר.
לריאגנט Foregene Protease יש נוסחה ייחודית.כדי להבטיח את פעילותו ויציבותו, נא לאחסן אותו ב-4℃למשך 12 חודשים.
מגיב 6×ניתן לאחסן מאגר טעינת DNA ב-4℃או -20℃במשך זמן רב.
יש לאחסן חלק II של ערכה זו ב-20-℃.
ריאגנט 2×PCR קלTMמיקס(UNG), אם נעשה בו שימוש תכוף, ניתן לאחסן אותו גם ב-4℃לאחסון לטווח קצר (השתמשו בו תוך 10 ימים).
