Lnc-RT Heroᵀᴹ I (עם gDNase) (סופר מיקס לסינתזת cDNA של גדיל ראשון מ-lncRNA)
מפרטים
25×20μl Rxns, 50×20μl Rxns
Lnc-RT HeroTM I (עם gDNase) היא מערכת שעתוק לאחור שפותחה במיוחד עבור lncRNA להסרה מהירה של זיהום DNA גנומי.5×gDNase Mix יכול להסיר במהירות את הגנום הנותר ב-RNA ב-42 מעלות צלזיוס למשך 2 דקות, ובכך למנוע ביעילות את הפרעות הגנום בתוצאות qPCR.
5×L-RT HeroTM Mix מכיל Foregene LncRNA Reverse Transcriptase שפותח במיוחד על ידי Foregene, שהוא סוג חדש של תמלול הפוך במיוחד עבור תבניות lncRNA ותבניות מורכבות RNA ארוכות אחרות, עם זיקה RNA חזקה יותר ויעילות רישום היפוך גבוהה יותר.המערכת המאופטימלית הופכת את קצב השעתוק ההפוך למהיר יותר ויכולה לתמלל בקלות תבניות RNA עם תוכן GC גבוה ומבנה משני מורכב.ניתן להשלים את סינתזת ה-cDNA של הגדיל הראשון ב-42°C תוך 15 דקות.
רכיבי ערכה
| 5× מיקס gDNase |
| 5× L-RT HeroTM Mix |
| ddH2O ללא RNase |
| הוראות |
תכונות ויתרונות
■יכולת יעילה להסרת gDNA, שיכולה להסיר gDNA בתבנית תוך 2 דקות.
■ זה יכול להפוך ביעילות שעתוק של lncRNA.כאשר תוצר השעתוק ההפוך נתון ל-qPCR, ערך ה-Ct נמוך מזה של מערכת השעתוק ההפוכה הקונבנציונלית.
■ מערכת שעתוק לאחור יעילה, לוקח רק 15 דקות להשלים את הסינתזה של cDNA הגדיל הראשון.
■ תבניות מורכבות: ניתן גם להפוך תבניות עם תוכן GC גבוה ומבנה משני מורכב ביעילות גבוהה.
■ מערכת שעתוק לאחור ברגישות גבוהה, תבניות ברמת pg יכולות גם לקבל cDNA באיכות גבוהה.
■ למערכת השעתוק ההפוך יש יציבות תרמית גבוהה, טמפרטורת התגובה האופטימלית היא 42℃, ועדיין יש לו ביצועי תמלול הפוך טובים ב-50℃.
יישום ערכה
ניתוח כמותי יחסי של lncRNA.
ניתוח כמותי מוחלט של lncRNA.
זה יכול לנתח במהירות ובדייקנות עקבות RNA כגון וירוס RNA.
שעתוק הפוך של תבניות RNA עם תכולת GC גבוהה או מבנה משני מורכב.
זרימת עבודה
אחסון וחיי מדף
יש לאחסן את הערכה ב-20-°ג. אחסן את המוצר במקרר בטמפרטורה קבועה ב-20-°ג מיד לאחר הקבלה.אם תנאי האחסון מתאימים, המוצר לא יפגע בביצועים כלשהם במהלך תקופת התוקף של שנה.
מדריך לניתוח בעיות
The following is an analysis of the problems that may be encountered in the use of Lnc-RT HeroTM I (With gDNase) series kits, hoping to be helpful to your experiments. In addition, we have dedicated technical support to help you with other experimental or technical problems beyond the operating instructions and questions. If you have any needs, please contact us: 028-83361257 or E-mail: Tech@foregene.com.
Non-הגברה ספציפית
1. עיצוב פריימר לא סביר
המלצה: עיצוב פריימרים לפי עקרונות עיצוב פריימר.
2. שאריות הגנום.
הצעה: ודא שהשלב הראשון של טמפרטורת התגובה להסרת gDNA הוא 42 מעלות צלזיוס, וניתן גם להאריך את זמן התגובה ל-5 דקות.
אין אות הגברה על ידי RT-qPCR
1. RNA מתכלה.
המלצה: החומר למיצוי RNA צריך להיות טרי ככל האפשר, ויש להשתמש ב-RNA איכותי וטוהר גבוה.
2. RNA מכיל מעכבים.
המלצה: מעכבי שעתוק לאחור כוללים בדרך כלל SDS, מלחי גואנידין, EDTA וכו'. מומלץ לשטוף את משקע ה-RNA עם 70% אתנול כדי להסיר את המעכבים.
3. בעיות עיצוב פריימר.
המלצה: על פי עיקרון תכנון הפריימר, תכנן מחדש את הפריימרים לבדיקה.
פס היעד מופיע בפקד הריק
1. זיהום של כלי הפעלה או ריאגנטים.
המלצה: יש לבצע חיטוי כל הריאגנטים או הציוד לניסוי.היה זהיר ועדין בעת הטיפול כדי למנוע מדגימות DNA להישאב לתוך הפיפטה או לשפוך החוצה מהצינור הצנטריפוגה.
2. זיהום אירע במהלך הכנת מערכת התגובה PCR.
המלצה: נקוט באמצעי הזהירות הדרושים בעת הטיפול, כגון: לבישת כפפות לטקס, שימוש בקצות סינון.השתמש בזמן אמת ב-PCR Mix במערכת עמידה בפני זיהום.
3. הפריימרים מתכלים.
הצעה: השתמש באלקטרופורזה של SDS-PAGE כדי לזהות אם הפריימרים מתכלים, והחליפו בפריימרים חדשים לניסויים בזיהוי הקרינה.
מדריך הוראות:
Lnc-RT HeroTM I(עם gDNase)(Super Premix לסינתזת cDNA של גדיל ראשון מ-lncRNA) מדריך הוראות
