ערכות לטיהור בידוד RNA כולל RNA מהתא
תיאור ערכה:
ניתן להשיג RNA כולל מטוהר ואיכותי מתאי תרבות שונים תוך 11 דקות.
ללא RNase
מופעל בטמפרטורת החדר (15-25℃)
עם עמודת ניקוי DNA
תפוקת RNA גבוהה
מהיר: סיים את החילוץ תוך 11 דקות
בטיחות: אין כימיקל אורגני
תיאור
ערכה זו משתמשת בעמודת הספין ובנוסחה שפותחה על ידי Foregene, שיכולה לחלץ ביעילות RNA כולל טוהר ואיכותי מתאי תרבית בצלחות 96, 24, 12 ו-6 בארות.
הערכה מספקת עמודת ניקוי יעילה של DNA, שיכולה להפריד בקלות את הסופרנטנט והליזט של התא, לקשור ולהסיר DNA גנומי.הפעולה פשוטה וחוסכת זמן.
Tעמודת ה-RNA בלבד יכולה לקשור RNA ביעילות עם נוסחה ייחודית.ניתן לעבד מספר רב של דגימות בו זמנית.
רכיבי ערכה
| הרכב ערכה | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| מאגר cRL1* | 25 מ"ל | 100 מ"ל |
| מאגר cRL2 | 15 מ"ל | 60 מ"ל |
| מאגר RW1* | 25 מ"ל | 100 מ"ל |
| מאגר RW2 | 24 מ"ל | 96 מ"ל |
| ddH2O ללא RNase | 10 מ"ל | 40 מ"ל |
| עמודת RNA בלבד | 50 | 200 |
| עמודת ניקוי DNA | 50 | 200 |
| הוראה | 1 | 1 |
*נא ללבוש כפפות ולנקוט באמצעי הגנה במהלך הפעולה שכן Buffer cRL1 ו-Buffer RW1 מכילים מלחים כאוטרופיים מגרים.
תכונות ויתרונות
■ התהליך כולו מופעל בטמפרטורת החדר (15-25℃), ללא אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה.
■ הערכה כולה היא RNase-Free, אין צורך לדאוג לפירוק RNA.
■ DNA-Cleaning Column קושר DNA באופן ספציפי, כך שהערכה יכולה להסיר זיהום DNA גנומי מבלי להוסיף DNase נוסף.
■ תפוקת RNA גבוהה: עמודה RNA בלבד ונוסחה ייחודית יכולים לטהר ביעילות RNA.
■ מהירות מהירה: קל לתפעול וניתן להשלים אותו תוך 11 דקות.
■ בטיחות: אין צורך בריאגנט אורגני.
■ איכות גבוהה: ה-RNA המטוהר הינו בטוהר גבוה, נקי מחלבונים וזיהומים אחרים, ויכול לעמוד בניסויים שונים הבאים.
יישום ערכה
זה מתאים למיצוי וטיהור של RNA כולל מתאי תרבית בצלחות 96, 24, 12 ו-6 בארות.
זרימת עבודה
תרשים
דיאגרמת סוללת הג'ל agarose של ערכת הבידוד של RNA Total RNA טיפלה במספרים השונים של תאים לעיל, elution 20μl נפח, קח 2μl מטוהר כולל RNA 1%.
אחסון וחיי מדף
ניתן לאחסן את הערכה למשך 12 חודשים בטמפרטורת החדר (15-25 ℃) או 2-8 ℃ למשך זמן ארוך יותר (24 חודשים).
ניתן לאחסן מאגר cRL1 ב-4 ℃ למשך חודש לאחר הוספת 2-hydroxy-1-ethanethiol (אופציונלי).
RNA אינו מופק או התשואות של RNA נמוכות
לעיתים קרובות ישנם מגוון גורמים המשפיעים על יעילות ההחלמה, כגון: תכולת RNA של דגימת רקמה, שיטת הפעולה, נפח הפליטה וכו'.
1. אמבט קרח או צנטריפוגה קריוגנית (4 מעלות צלזיוס) בוצעה במהלך הפעולה.
המלצה: פעל בטמפרטורת החדר (15-25 מעלות צלזיוס) לאורך כל התהליך, אל תעשה אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורות נמוכות.
2. שימור דגימה לא תקין או זמן אחסון מופרז של דגימות.
המלצה: אחסן דגימות ב-80 מעלות צלזיוס או הקפאה בחנקן נוזלי והימנע משימוש חוזר בהקפאה-הפשרה;נסו להשתמש ברקמות טריות או בתאים מתורבתים לצורך מיצוי RNA.
3. תמוגה לא מספקת של דגימה.
המלצה: בעת הומוגניזציה של רקמות, ודא שהרקמה הומוגנית מספיק ושתאי הרקמה מפוצלים מספיק כדי להסביר את שחרור ה-RNA.
4. המסיר לא הוסף כהלכה.
המלצה: אשר כי RNase-Free ddH2O מתווסף טיפה לאמצע קרום עמודת הטיהור.
5. הנפח הנכון של אתנול מוחלט לא התווסף למאגר RL2 או למאגר RW2.
המלצה: עקוב אחר ההוראות, הוסף את הנפח הנכון של אתנול מוחלט למאגר RL2 ול-Buffer RW2 וערבב היטב לפני השימוש בערכה.
6. מינון דגימת רקמות אינו מתאים.
המלצה: השתמש ב-10-20 מ"ג של רקמה או (1-5) × 106תאים לכל 500 μl חיץ RL1, כמו שימוש מוגזם ברקמה יכול לגרום לחילוץ RNA מופחת.
7. נפח חלוקה לא תקין או שחרור לא שלם.
המלצה: נפח האלוציה של עמודת הטיהור הוא 50-200 μl;אם אפקט החלוקה אינו משביע רצון, מומלץ להאריך את זמן המיקום בטמפרטורת החדר לאחר הוספת RNase-Free ddH מחומם מראש2הו, למשל למשך 5-10 דקות.
8. בעמודת הטיהור יש שאריות אתנול לאחר שטיפת Buffer RW2.
המלצה: אם יש שאריות אתנול לאחר שטיפת Buffer RW2, צנטריפוגה של צינור ריק למשך 1 דקה, ניתן להגדיל את זמן פעולת הצנטריפוגה של צינור ריק ל-2 דקות, או שניתן למקם את עמודת הטיהור בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להסיר כראוי את שאריות האתנול.
RNA מטוהר מתכלה
איכות ה-RNA המטוהרת קשורה לגורמים כמו שימור הדגימה, זיהום RNase ומניפולציה וכו'.
1. דגימות רקמות אינן נשמרות בזמן.
המלצה: אם לא נעשה שימוש בדגימות רקמה או תאים בזמן לאחר האיסוף, שמור מיד ב-80 מעלות צלזיוס או בחנקן נוזלי.כדי לחלץ RNA, השתמש בדגימת רקמה או תא שנלקחה לאחרונה במידת האפשר.
2. הקפאה-הפשרה חוזרת של דגימות רקמה.
המלצה: כשמאחסנים דגימות רקמה, עדיף לחתוך אותן לחתיכות קטנות לשימור, ולהסיר אחת מהחתיכות בעת השימוש בהן כדי למנוע הקפאה-הפשרה חוזרת של הדגימה ופירוק ה-RNA.
3. RNase מוכנס או לא לובש כפפות חד פעמיות, מסכות וכו' במהלך הניתוח.
המלצה: ניסויי מיצוי RNA מבוצעים בצורה הטובה ביותר בחדרי מניפולציה נפרדים של RNA והטבלה מנוקה לפני הניסוי.
ללבוש כפפות ומסכות חד פעמיות במהלך הניסוי כדי למזער את פירוק ה-RNA שנגרם כתוצאה מהחדרת RNase.
4. ריאגנטים מזוהמים עם RNase במהלך השימוש.
המלצה: החלף בערכת בידוד כוללת RNA חדשה של בעלי חיים לניסויים קשורים.
5. צינורות הצנטריפוגות, העצות וכו' המשמשים במניפולציה של RNA מזוהמים ב-RNase.
המלצה: אשר שצינורות הצנטריפוגות, העצות, הפיפטות וכו' המשמשים למיצוי RNA כולם ללא RNase.
RNA מטוהר שהושג משפיע על ניסויים במורד הזרם
RNA מטוהר על ידי עמודת הטיהור, אם יוני המלח, תכולת החלבון גדולה מדי תשפיע על הניסוי במורד הזרם, כגון: שעתוק הפוך, Northern Blot et al.
1. ל-RNA הנשלף יש שאריות של יוני מלח.
המלצה: אשר שהנפח הנכון של אתנול נוסף למאגר RW2 ובצע 2 שטיפות עמודות טיהור במהירות הצנטריפוגלית המצוינת לפעולה;אם יש שאריות של יוני מלח, השאר את עמודת הטיהור למאגר RW2 למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר ובצע צנטריפוגה כדי למקסם את הסרת זיהום המלח.
2. שאריות אתנול ב-RNA שנפלט.
המלצה: אשר שלאחר שטיפת חיץ RW2, בצע את פעולת הצנטריפוגה של הצינור הריק במהירות הצנטריפוגה המצוינת לפעולה, הגדל את זמן פעולת הצנטריפוגה של הצינור הריק ל-2 דקות אם עדיין יש שאריות אתנול, או השאר אותו בטמפרטורת החדר למשך 5 מ'
