ערכת בידוד RNA Total RNA של בעלי חיים ערכות מיצוי וטיהור כולל של RNA עבור רקמות ותאים של בעלי חיים
תיאור ערכה:
חילוץ מהיר ויעיל של RNA כולל בטוהר גבוה ואיכותי מרקמות בעלי חיים שונות.
אין צורך לדאוג לפירוק RNA.המערכת כולה היא RNase-Free
הסר DNA ביעילות באמצעות עמודת ניקוי DNA
הסר DNA מבלי להוסיף DNase
פשוט - כל הפעולות מסתיימות בטמפרטורת החדר
מהיר - ניתן להשלים את הפעולה תוך 30 דקות
בטוח - אין שימוש מגיב אורגני
טוהר גבוה-OD260/280≈1.8-2.1
תיאורי ערכות
50 הכנות, 200 הכנות
ערכה זו משתמשת ב-עמודה ספין ונוסחהשפותחה על ידי החברה שלנו, שיכולה לחלץ RNA כולל בטוהר גבוה ואיכותי מרקמות בעלי חיים שונות ביעילות גבוהה. הוא מספק עמודת ניקוי DNA יעילה, שיכולה להפריד ולספוג DNA גנומי בקלות מהסופרנטנט ומהליזט של רקמות, פשוט וחוסך זמן;עמודת RNA בלבד יכולה לקשור RNA ביעילות וניתן לעבד אותה בו-זמנית עם נוסחה ייחודית המון דגימות.
המערכת כולה היא RNase-Free, כך שה-RNA המופק אינו מתכלה;Buffer RW1, Buffer RW2 מערכת שטיפת חיץ, כך שה-RNA המתקבל נקי מחלבון, DNA, יונים וזיהום תרכובות אורגניות.
רכיבי ערכה
| ערכת בידוד כולל RNA של בעלי חיים | ||
| רכיבי ערכה | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| מאגר RL1* | 25 מ"ל | 100 מ"ל |
| מאגר RL2 | 15 מ"ל | 60 מ"ל |
| מאגר RW1* | 25 מ"ל | 100 מ"ל |
| מאגר RW2 | 24 מ"ל | 96 מ"ל |
| ddH2O ללא RNase | 10 מ"ל | 40 מ"ל |
| עמודה ל-RNA בלבד | 50 | 200 |
| עמודת ניקוי DNA | 50 | 200 |
| מדריך הוראות | 1 חתיכה | 1 חתיכה |
מידע על המוצר
| פוּרמָט | עמודת ספין | רכיב טיהור | טור Foregene, מגיב |
| שֶׁטֶף | 1-24 דוגמאות | זמן לכל הכנה | ~30 דקות (24 דוגמאות) |
| סַרכֶּזֶת | צנטריפוגה שולחנית | הפרדת פירוליזה | הפרדה צנטריפוגלית |
| לִטעוֹם | רקמת בעלי חיים;תָא | כמות דגימות | רקמה: 10-20 מ"ג;תא:(1-5)×106 |
| נפח שחרור | 50-200 μL | נפח טעינה מקסימלי | 850 μL |
תכונות ויתרונות
■ אין צורך לדאוג לפירוק RNA;המערכת כולה היא RNase-Free
■ הסר ביעילות DNA באמצעות עמודת ניקוי DNA
■ הסר DNA מבלי להוסיף DNase
■ הפעולות הפשוטות - כל הפעולות מסתיימות בטמפרטורת החדר
■ ניתן להשלים פעולה מהירה תוך 30 דקות
■ בטוח - אין צורך בריאגנט אורגני
■ טוהר גבוה -OD260/280≈1.8-2.1
יישום ערכה
זה מתאים למיצוי וטיהור של RNA כולל ממגוון רקמות טריות או קפואות של בעלי חיים או תאים מתורבתים.
פרמטרים של מוצר
■ יישומים במורד הזרם: סינתזת cDNA של גדיל ראשון, RT-PCR, שיבוט מולקולרי, Northern Blot וכו'.
■ דגימות: רקמות של בעלי חיים, תאים מתורבתים
■ מינון: רקמות 10-20 מ"ג, תאים(2-5)×106
■ קיבולת חיבור DNA מקסימלית של עמודת הטיהור: 80 מיקרוגרם
■ נפח חלוקה: 50-200 μl
תרשים
ערכת בידוד RNA Total RNA של בעלי חיים מטופלת 20 מ"ג
דגימות עכבר טריות, קח 5% RNA מטוהר כולל 1% אגר
אלקטרופורזה של גליקוגל
1: טחול 2: כליה
3: כבד 4: לב
אחסון וחיי מדף
ניתן לאחסן את הערכה למשך 24 חודשים בטמפרטורת החדר (15-25 ℃) או 2-8 ℃ למשך זמן רב יותר.ניתן לאחסן את המאגר RL1 ב-4 ℃ למשך חודש לאחר הוספת β- mercaptoethanol (אופציונלי).
מאמרים שצוטטו
1.IF:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.ננו-חלקיקים דמויי ליפידים טעוני mRNA לעריכת בסיס כבד באמצעות אופטימיזציה של עיצוב מרוכב מרכזי.עו"דפונקציה.מאטר.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF:18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.אפופטוזיס ספונטני של תאים בהכנה טיפולית של תאי גזע מפעילים השפעות אימונומודולטוריות באמצעות שחרור של פוספטידילסרין.מטרת העברת אותות Ther.2021 14 ביולי;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.IF:17.97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.שינוי tRNA של N7-Methylguanosine משפר את תרגום ה-mRNA האונקוגני ומקדם התקדמות כולנגיוקרצינומה תוך-כבדית.מול תא.2021 ביולי 29:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, ועוד.שינוי m6A בתיווך Mettl14 מקל על התחדשות הכבד על ידי שמירה על הומאוסטזיס רשתית אנדופלזמית.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
ערכות איבוד RNA עבור מקורות לדוגמה אחריםפנויים:
תא, צמח, ויראלי, דם וכו'.
RNA אינו מופק או התשואות של RNA נמוכות
לעיתים קרובות ישנם מגוון גורמים המשפיעים על יעילות ההחלמה, כגון: תכולת RNA של דגימת רקמה, שיטת הפעולה, נפח הפליטה וכו'.
1. אמבט קרח או צנטריפוגה קריוגנית (4 מעלות צלזיוס) בוצעה במהלך הפעולה.
המלצה: פעל בטמפרטורת החדר (15-25 מעלות צלזיוס) לאורך כל התהליך, אל תעשה אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורות נמוכות.
2. שימור דגימה לא תקין או זמן אחסון מופרז של דגימות.
המלצה: אחסן דגימות ב-80 מעלות צלזיוס או הקפאה בחנקן נוזלי והימנע משימוש חוזר בהקפאה-הפשרה;נסו להשתמש ברקמות טריות או בתאים מתורבתים לצורך מיצוי RNA.
3. תמוגה לא מספקת של דגימה.
המלצה: בעת הומוגניזציה של רקמות, ודא שהרקמה הומוגנית מספיק ושתאי הרקמה מפוצלים מספיק כדי להסביר את שחרור ה-RNA.
4. המסיר לא הוסף כהלכה.
המלצה: אשר כי RNase-Free ddH2O מתווסף טיפה לאמצע קרום עמודת הטיהור.
5. הנפח הנכון של אתנול מוחלט לא התווסף למאגר RL2 או למאגר RW2.
המלצה: עקוב אחר ההוראות, הוסף את הנפח הנכון של אתנול מוחלט למאגר RL2 ול-Buffer RW2 וערבב היטב לפני השימוש בערכה.
6. מינון דגימת רקמות אינו מתאים.
המלצה: השתמש ב-10-20 מ"ג של רקמה או (1-5) × 106תאים לכל 500 μl חיץ RL1, כמו שימוש מוגזם ברקמה יכול לגרום לחילוץ RNA מופחת.
7. נפח חלוקה לא תקין או שחרור לא שלם.
המלצה: נפח האלוציה של עמודת הטיהור הוא 50-200 μl;אם אפקט החלוקה אינו משביע רצון, מומלץ להאריך את זמן המיקום בטמפרטורת החדר לאחר הוספת RNase-Free ddH מחומם מראש2הו, למשל למשך 5-10 דקות.
8. בעמודת הטיהור יש שאריות אתנול לאחר שטיפת Buffer RW2.
המלצה: אם יש שאריות אתנול לאחר שטיפת Buffer RW2, צנטריפוגה של צינור ריק למשך 1 דקה, ניתן להגדיל את זמן פעולת הצנטריפוגה של צינור ריק ל-2 דקות, או שניתן למקם את עמודת הטיהור בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להסיר כראוי את שאריות האתנול.
RNA מטוהר מתכלה
איכות ה-RNA המטוהרת קשורה לגורמים כמו שימור הדגימה, זיהום RNase ומניפולציה וכו'.
1. דגימות רקמות אינן נשמרות בזמן.
המלצה: אם לא נעשה שימוש בדגימות רקמה או תאים בזמן לאחר האיסוף, שמור מיד ב-80 מעלות צלזיוס או בחנקן נוזלי.כדי לחלץ RNA, השתמש בדגימת רקמה או תא שנלקחה לאחרונה במידת האפשר.
2. הקפאה-הפשרה חוזרת של דגימות רקמה.
המלצה: כשמאחסנים דגימות רקמה, עדיף לחתוך אותן לחתיכות קטנות לשימור, ולהסיר אחת מהחתיכות בעת השימוש בהן כדי למנוע הקפאה-הפשרה חוזרת של הדגימה ופירוק ה-RNA.
3. RNase מוכנס או לא לובש כפפות חד פעמיות, מסכות וכו' במהלך הניתוח.
המלצה: ניסויי מיצוי RNA מבוצעים בצורה הטובה ביותר בחדרי מניפולציה נפרדים של RNA והטבלה מנוקה לפני הניסוי.
ללבוש כפפות ומסכות חד פעמיות במהלך הניסוי כדי למזער את פירוק ה-RNA שנגרם כתוצאה מהחדרת RNase.
4. ריאגנטים מזוהמים עם RNase במהלך השימוש.
המלצה: החלף בערכת בידוד כוללת RNA חדשה של בעלי חיים לניסויים קשורים.
5. צינורות הצנטריפוגות, העצות וכו' המשמשים במניפולציה של RNA מזוהמים ב-RNase.
המלצה: אשר שצינורות הצנטריפוגות, העצות, הפיפטות וכו' המשמשים למיצוי RNA כולם ללא RNase.
RNA מטוהר שהושג משפיע על ניסויים במורד הזרם
RNA מטוהר על ידי עמודת הטיהור, אם יוני המלח, תכולת החלבון גדולה מדי תשפיע על הניסוי במורד הזרם, כגון: שעתוק הפוך, Northern Blot et al.
1. ל-RNA הנשלף יש שאריות של יוני מלח.
המלצה: אשר שהנפח הנכון של אתנול נוסף למאגר RW2 ובצע 2 שטיפות עמודות טיהור במהירות הצנטריפוגלית המצוינת לפעולה;אם יש שאריות של יוני מלח, השאר את עמודת הטיהור למאגר RW2 למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר ובצע צנטריפוגה כדי למקסם את הסרת זיהום המלח.
2. שאריות אתנול ב-RNA שנפלט.
המלצה: אשר שלאחר שטיפת חיץ RW2, בצע את פעולת הצנטריפוגה של הצינור הריק במהירות הצנטריפוגה המצוינת לפעולה, הגדל את זמן פעולת הצנטריפוגה של הצינור הריק ל-2 דקות אם עדיין יש שאריות אתנול, או השאר אותו בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות לאחר הצנטריפוגה של הצינור הריק כדי למקסם את הסרת שאריות אתנול.
