ערכת בידוד כולל RNA של צמחים פלוס ערכת טיהור כולל RNA לצמח עשיר בפוליסכרידים ופוליפנולים
תיאור ערכה:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
לטיהור RNA כולל מדגימות צמחים כלליות המכילות רכיבי פוליסכריד ופוליפנולים גבוהים.
מיצוי במהירות RNA כולל באיכות גבוהה מדגימות צמחים עם תכולה גבוהה של פוליסכרידים ופוליפנולים.
ללא RNase באמצעות עמודת ניקוי DNA
פשוט - כל הפעולות מסתיימות בטמפרטורת החדר
מהיר - ניתן להשלים את הפעולה תוך 30 דקות
בטוח - אין שימוש מגיב אורגני 
מפרטים
50 הכנות, 200 הכנות
הערכה משתמשת בעמודת הספין ובנוסחה שפותחה על ידי Foregene, שיכולה לחלץ ביעילות RNA כולל בטוהר גבוה ואיכותי מרקמות צמחיות שונות עם תכולת פוליסכרידים או פוליפנולים גבוהה.הוא מספק את עמודת ה-DNA-Cleaning שיכולה להסיר בקלות DNA גנומי מהסופרנטנט ומליזט הרקמה.עמודה RNA בלבד יכולה לקשור ביעילות RNA.הערכה יכולה לעבד מספר רב של דגימות בו זמנית.
המערכת כולה אינה מכילה RNase, כך שה-RNA המטוהר לא יתפרק.Buffer PRW1 ו-Buffer PRW2 יכולים להבטיח שה-RNA המתקבל אינו מזוהם בחלבון, DNA, יונים ותרכובות אורגניות.
רכיבי ערכה
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| מאגר PRW1, מאגר PRW2 |
| ddH ללא RNase2הו, עמודת ניקוי DNA |
| עמודת RNA בלבד |
תכונות ויתרונות
■ פעולה בטמפרטורת החדר (15-25℃) לאורך כל התהליך, ללא אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה.
■ ערכה מלאה ללא RNase, אין צורך לדאוג לפירוק RNA.
■ מתאים במיוחד לטיהור RNA מדגימות צמחים של פוליסכרידים ופוליפנולים.
■ DNA-Cleaning Column נקשר באופן ספציפי ל-DNA, כך שהערכה יכולה להסיר זיהום DNA גנומי מבלי להוסיף DNase.
■ תפוקת RNA גבוהה: עמודה RNA בלבד ונוסחה ייחודית יכולים לטהר ביעילות RNA.
■ מהירות מהירה: קל לתפעול וניתן להשלים אותו תוך 30 דקות.
■ בטיחות: אין צורך בריאגנט אורגני.
■ איכות גבוהה: שברי ה-RNA המטוהרים הינם בטוהר גבוה, ללא חלבון וזיהומים אחרים, ויכולים לעמוד ביישומים ניסויים שונים במורד הזרם.
פרמטרים של מוצר
■ יישומים במורד הזרם: סינתזת cDNA של גדיל ראשון, RT-PCR, שיבוט מולקולרי, Northern Blot וכו'.
■ דוגמה: רקמות צמחיות טריות או קפואות של פוליסכרידים ופוליפנולים
■ מינון: 50 מ"ג רקמה צמחית
■ קיבולת קישור RNA מקסימלית של עמודת הטיהור: 80 מיקרוגרם
■ נפח חלוקה: 50-200 μl
יישום ערכה
זה מתאים למיצוי וטיהור של RNA כולל מדגימות רקמות צמחיות טריות או קפואות (במיוחד רקמת עלים טריים) עם תכולת פוליסכרידים ופוליפנולים גבוהים.
זרימת עבודה
תרשים
Plant Total RNA Isolation Kit Plus עיבד 50 מ"ג של עלים טריים של פוליסכרידים ופוליפנולים, ו-5% RNA מטוהר נבדק באלקטרופורזה.
1: בננה
2: גינקו
3: כותנה
4: רימון
אחסון וחיי מדף
ניתן לאחסן ערכה זו למשך 24 חודשים בתנאים יבשים בטמפרטורת החדר (15-25℃);אם יש צורך לאחסן אותו לזמן ארוך יותר, ניתן לאחסן אותו בטמפרטורה של 2-8 מעלות צלזיוס.
ניתן למקם את המאגר PSL1 ב-4℃ למשך חודש לאחר הוספת β-מרקפטואתנול (מומלץ להוסיף אותו באותו זמן של הניסוי).
העמוד נסתם
לאחר סתום העמודה, תפוקת ה-RNA מופחתת או אפילו בלתי אפשרית כדי לטהר את ה-RNA, ומסת ה-RNA המתקבלת נמוכה.
ניתוח סיבות נפוצות:
1. הפסקות לדוגמא אינן יסודיות.
שבירת דגימה אינה גורמת לחלוטין לחסימת עמודת ניקוי ה-DNA, תוך שהיא משפיעה על תפוקת ה-RNA ועל איכותו.אנו ממליצים על פעולת טחינה מהירה בחנקן נוזלי מספיק כאשר שברת את הדגימות, נסה לרסק את דופן התא המדגם, קרום התא ורקמות אחרות.עבור דגימות צמחים של פוליסכרידים פוליאלים, אנו ממליצים להשתמש ב-Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
2. כאשר שואבים את העל הדגימה המופרדת עם עמודת ניקוי DNA, המשקע האפשרי של התא עשוי להישאף.
המשקעים המפוצלים של התא יגרמו לעמודת ה-RNA-ONLY אשר תיחסם בעת ביצוע פעולת ספיחת ה-RNA (ראה שלב 6).אנו ממליצים לך בזהירות כשאתה שואב את הסופרנטנט הזה כדי למנוע מציצת פסולת תאים.
3. הכמות הראשונית לדוגמא גדולה מדי.
שימוש מוגזם בדגימה יגרום לפיצול דגימה לא שלם או תמוגה לא מלאה של תאים על ידי Buffer PSL1, וכתוצאה מכך לחסימה של עמודת הטיהור במהלך הטיהור.ערכת בידוד כולל RNA של צמח כל דגימת הפעלה מטוהרת בודדת היא 50 מ"ג.עבור דגימות צמחים של פוליסכרידים פוליאלים, אנו ממליצים לנסות את Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. הטמפרטורה של הצנטריפוגה נמוכה מדי.
כל תהליך הבידוד והטיהור של ה-RNA מתבצע בטמפרטורת החדר (20-25°C), אלא שרקמת המדגם נשברת על ידי חנקן נוזלי. הטמפרטורה של כמה צנטריפוגות קריוגניות נמוכה מ-20℃, שעלול לגרום לחסימה של עמודת ניקוי DNA ו/או עמודת RNA בלבד.אם זה קורה, הגדר את טמפרטורת הצנטריפוגה ל-20-25℃, וודא שתערובת התמוגה ו/או הסופרנטנט בתוספת אתנול חוממו מראש ל-37°C.
לא מופק RNA או תפוקת RNA נמוכה
בדרך כלל ישנם גורמים רבים המשפיעים על יעילות ההחלמה, כגון: תכולת RNA מדגם, שיטת הפעולה, נפח הפליטה וכו'.
ניתוח של סיבות נפוצות להלן:
1. בוצעה אמבט קרח או צנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה (4 מעלות צלזיוס) במהלך הפעולה.
הצעה: יש לפעול בטמפרטורת החדר (15-25°ג) בכל התהליך, אל תעשה אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה.
2. ה-RNA הושפל עקב שימור לא תקין של הדגימה או שימור לטווח ארוך של הדגימה.
המלצה: יש להקפיא במהירות דגימות שנאספו טרי בחנקן נוזלי, ולאחר מכן לאחסן ב-80 מעלות צלזיוס למשך זמן רב, להימנע מהקפאה והפשרה חוזרת של דגימות;או להשרות מיד את הדגימות בתמיסת RNAlater מייצב RNA (דגימות מהחי).
3. פיצול דגימה לא מספיק ותמוגה מובילים לחסימה של עמודת הטיהור.
הצעה: בעת טחינת הרקמה, אנא ודא שהרקמה טחונה מספיק, והעבר אותה במהירות למאגר PSL1 שהוכן מראש (וודא שהפרופורציה הנכונה של β-ME נוספה, ראה שלב 1 של ההליך).
4.הפלט נוסף בצורה שגויה.
הצעה: ודא ש-RNase-Free ddH2O מטפטף לאמצע קרום עמודת הטיהור.
5. הנפח הנכון של אתנול מוחלט לא התווסף למאגר PSL2 או למאגר PRW2.
הצעה: אנא עקוב אחר ההוראות, הוסף את הנפח הנכון של אתנול מוחלט למאגר PSL2 ול-Buffer PRW2 וערבב היטב לפני השימוש בערכה.
6. כמות דגימת הרקמה אינה הולמת.
הצעה: השתמש ב-50 מ"ג של רקמה לכל 500 μl של Buffer PSL1.שימוש בכמות גדולה מדי של רקמה יקטין את כמות ה-RNA המופק וטוהר ה-RNA המתקבל יקטן אף הוא.אנו ממליצים בחום שהמינון הראשוני של הדגימה לא יעלה על 50 מ"ג לכל פעולת מיצוי RNA.
7. נפח חלוקה לא מתאים או שחרור לא שלם.
הצעה: נפח eluent של עמודת הטיהור הוא 50-200 μl;אם אפקט האלוציה אינו משביע רצון, מומלץ להאריך את הזמן בטמפרטורת החדר לאחר הוספת RNase-Free ddH2O מחומם מראש, כגון 5-10 דקות.
8. בעמודת הטיהור יש שאריות אתנול לאחר כביסה עם BufferPRW2.
הצעה: אם הצינור הריק עובר צנטריפוגה למשך דקה ועדיין נותר אתנול לאחר הכביסה במאגר PRW2, אתה יכול להגדיל את זמן הצנטריפוגה של הצינור הריק ל-2 דקות, או למקם את עמודת הטיהור בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להסיר לחלוטין את שאריות האתנול.
9. נעשה שימוש לא נכון בערכה.
הצעה: עבור דגימות צמחים של פוליסכרידים פוליפנוליים, ייתכן ששימוש בערכות נפוצות כגון Plant Total RNA Isolation Kit לא יוכל להשיג דגימות RNA אידיאליות.אנו ממליצים לך להשתמש ב-Plant Total RNA IsolationKit Plus, אשר תוכנן במיוחד עבור דגימות צמחים פוליסכרידים פוליפנוליים.ערכה שפותחה במיוחד להפקת RNA מדגימות צמחי פוליפנול ופוליסכריד.
ערך OD260/OD280 נמוך
פליטת RNA עם ddH2O ומשמשת לקריאות ספקטרופוטומטר גורמת לערכי OD260/OD280 נמוכים.אנו ממליצים להשתמש ב-10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (ולא ב-RNase-Free ddH2O להוצאת RNA) כדי להשיג ערכי OD260/OD280 נכונים יחסית, ראה "מבחני ריכוז וטיהור RNA" בעמוד 19.
ה-RNA המטוהר מתכלה
איכות ה-RNA המטוהרת קשורה לגורמים כמו שימור דגימות, זיהום RNase ומניפולציה.
ניתוח של סיבות נפוצות:
1. דגימות רקמות לא אוחסנו בזמן לאחר האיסוף.
המלצה: אם לא נעשה שימוש בדגימות הרקמה בזמן לאחר האיסוף, נא לאחסן אותן בחנקן נוזלי בטמפרטורה נמוכה באופן מיידי או להעביר אותן ל-80 מעלות צלזיוס לאחסון לטווח ארוך לאחר הקפאה מהירה בחנקן נוזלי, או לטבול מיד את הדגימות בתמיסת RNAlater מייצב RNA (דגימות מהחי).עבור מיצוי RNA, נסה להשתמש בדגימות רקמה טריות שנאספו.
2. הקפאה והפשרה חוזרת של דגימות רקמה.
הצעה: כשמאחסנים דגימות רקמה, עדיף לחתוך אותן לחתיכות קטנות לשימור, ולהוציא חלק מהן בעת השימוש בהן כדי למנוע פירוק ה-RNA הנגרמת מהקפאה והפשרה חוזרת של הדגימות.
3. RNase מוכנס לחדר הניתוח או לא לובשים כפפות חד פעמיות, מסכות וכו'.
הצעה: ניסויי מיצוי RNA מבוצעים בצורה הטובה ביותר בפעולות RNA נפרדות, ויש לנקות את טבלת המעבדה לפני הניסוי, וללבוש כפפות ומסכות חד פעמיות במהלך הניסוי כדי למנוע פירוק RNA שנגרם מהחדרת RNase במידה רבה ביותר.
4. המגיב מזוהם על ידי RNase במהלך השימוש.
הצעה: החלף בסדרה חדשה של ערכות מיצוי RNA כולל של צמחים לניסויים קשורים.
5. צינורות הצנטריפוגה וקצות הפיפטה המשמשים למניפולציה של RNA מזוהמים עם RNase.
הצעה: ודא שצינורות הצנטריפוגה, קצות הפיפטה, הפיפטות וכו' המשמשים בחילוץ RNA הם כולם ללא RNase.
מדריכי הוראות:
Kit Total RNA Isolation Plant Plus מדריך הוראות
