ערכת בידוד כולל RNA של צמחים ערכת טיהור כולל RNA עבור צמחים דלי פוליסכרידים ופוליפנולים
מפרטים
50 הכנות, 200 הכנות
הערכה משתמשת בעמודת הספין ובנוסחה שפותחה על ידי Foregene, שיכולה לחלץ ביעילות RNA כולל בטוהר גבוה ואיכותי מרקמות צמחיות שונות עם תכולת פוליסכרידים ופוליפנולים נמוכה.עבור דגימות צמחים עם תכולת פוליסכרידים או פוליפנולים גבוהים, מומלץ להשתמש בערכת Plant Total RNA Isolation Plus כדי לקבל תוצאות טובות יותר של מיצוי RNA.הערכה מספקת את עמודת ה-DNA-Cleaning שיכולה להסיר בקלות DNA גנומי מהסופרנטנט ומהליזט של הרקמה.עמודה RNA בלבד יכולה לקשור ביעילות RNA.הערכה יכולה לעבד מספר רב של דגימות בו זמנית.
המערכת כולה אינה מכילה RNase, כך שה-RNA המטוהר לא יתפרק.Buffer PRW1 ו-Buffer PRW2 יכולים להבטיח שה-RNA המתקבל אינו מזוהם בחלבון, DNA, יונים ותרכובות אורגניות.
רכיבי ערכה
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| מאגר PRW1, מאגר PRW2 |
| ddH ללא RNase2הו, עמודת ניקוי DNA |
| עמודת RNA בלבד |
| הוראות |
תכונות ויתרונות
■ פעולה בטמפרטורת החדר (15-25℃) לאורך כל התהליך, ללא אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה.
■ ערכה מלאה ללא RNase, אין צורך לדאוג לפירוק RNA.
■ DNA-Cleaning Column נקשר באופן ספציפי ל-DNA, כך שהערכה יכולה להסיר זיהום DNA גנומי מבלי להוסיף DNase.
■ תפוקת RNA גבוהה: עמודה RNA בלבד ונוסחה ייחודית יכולים לטהר ביעילות RNA.
■ מהירות מהירה: קל לתפעול וניתן להשלים אותו תוך 30 דקות.
■ בטיחות: אין צורך בריאגנט אורגני.
■ איכות גבוהה: שברי ה-RNA המטוהרים הינם בטוהר גבוה, ללא חלבון וזיהומים אחרים, ויכולים לעמוד ביישומים ניסויים שונים במורד הזרם.
יישום ערכה
הוא מתאים למיצוי וטיהור של RNA כולל מדגימות רקמות צמחיות טריות או קפואות (במיוחד רקמת עלי צמחים טריים) עם תכולת פוליסכרידים ופוליפנולים נמוכים.
זרימת עבודה
תרשים
Plant Total RNA Isolation Kit Plus עיבד 50 מ"ג של עלים טריים של פוליסכרידים ופוליפנולים, ו-5% RNA מטוהר נבדק באלקטרופורזה.
1: בננה
2: גינקו
3: כותנה
4: רימון
אחסון וחיי מדף
ניתן לאחסן את הערכה למשך 12 חודשים בטמפרטורת החדר (15-25 ℃) בסביבה יבשה, ו-2-8 ℃ למשך זמן ארוך יותר (24 חודשים).
ניתן לאחסן את המאגר PSL1 ב-4 ℃ למשך חודש לאחר הוספת 2-hydroxy-1-ethanethiol (אופציונלי).
מדריך לניתוח בעיות
הניתוח הבא של הבעיות שבהן אתה עלול להיתקלצמח סך הכלRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
עמוד הספין סתום
חסימה של עמודת הספין תגרום להפחתת תפוקת ה-RNA או אפילו לא ניתן לטהר אותה לקבלת RNA, ואיכות ה-RNA המתקבל תהיה נמוכה.
ניתוח סיבה נפוצה:
1. המדגם לא נשבר לחלוטין.
פיצול דגימה לא שלם יכול לחסום את עמודת ניקוי ה-DNA, מה שעלול להשפיע גם על תפוקת ה-RNA ועל איכותו.אנו ממליצים בעת ביצוע פיצול דגימה, לטחון במהירות בכמויות מספיקות של חנקן נוזלי כדי לפרק את הרקמות כגון דפנות התא וממברנות התאים של הדגימות ככל האפשר.עבור דגימות צמחים של פוליסכרידים פוליפנולים, אנו ממליצים להשתמש ב-Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2. לשאוב את ה-DNA-Cleaning Column supernatant מבודד, לשאוב את גלולת פסולת התא האפשרית.
גלולת פסולת תאים נשאבת יכולה לסתום את עמודת ה-RNA בלבד במהלך הליכי ספיחת RNA (ראה שלב 5 של ההליך, שלב 6 של הליך הפוליפנול הפוליסכריד).אנו ממליצים לנקוט זהירות בעת שאיבת הסופרנטנט הזה כדי למנוע שאיבת פסולת תאים.
3. הכמות הראשונית של המדגם גדולה מדי.
שימוש מופרז בדגימות יגרום לפיצול דגימה לא שלם או תמוגה לא מלאה של תאים על ידי Buffer PRL1 או Buffer PSL1, וכתוצאה מכך עמודת טיהור סתומה לפעולות טיהור.ערכת בידוד RNA Total RNA כוללת מקסימום ראשוני של 50 מ"ג לכל טיהור בודד של דגימה מופעלת.עבור דגימות צמחים של פוליסכרידים פוליפנולים, אנו ממליצים לנסות את ערכת הבידוד של Plant Total RNA Plus.
4. הטמפרטורה של הצנטריפוגה נמוכה מדי.
בידוד וטיהור RNA שלם למעט שיבוש חנקן נוזלי של רקמת המדגם, כל השלבים מבוצעים בטמפרטורת החדר (20-25 מעלות צלזיוס).לחלק מהצנטריפוגות בטמפרטורה נמוכה יש טמפרטורות מתחת ל-20 מעלות צלזיוס, מה שעלול לגרום לחסימות בעמודת הניקוי של ה-DNA ו/או בעמודת ה-RNA בלבד.אם זה קורה, הגדר את טמפרטורת הצנטריפוגה ל-20-25 מעלות צלזיוס וחממו מראש את תערובת התמוגה ו/או תוספת של סופרנטנט הפרדת אתנול ל-37 מעלות צלזיוס.
לא מופק RNA או תפוקת RNA נמוכה
בדרך כלל ישנם גורמים רבים המשפיעים על יעילות ההחלמה, כגון: תכולת RNA מדגם, שיטת הפעולה, נפח הפליטה וכו'.
ניתוח של סיבות נפוצות להלן:
1. בוצעה אמבט קרח או צנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה (4 מעלות צלזיוס) במהלך הפעולה.
הצעה: פעל בטמפרטורת החדר (15-25 מעלות צלזיוס) בכל התהליך, אל תעשה אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה.
2.ה-RNA הושפל עקב שימור לא נכון של הדגימה או שימור ארוך טווח של הדגימה.
המלצה: יש להקפיא במהירות דגימות שנאספו טרי בחנקן נוזלי, ולאחר מכן לאחסן ב-80 מעלות צלזיוס למשך זמן רב, להימנע מהקפאה והפשרה חוזרת של דגימות;או להשרות מיד את הדגימות בתמיסת RNAlater מייצב RNA (דגימות מהחי).
3.פיצול דגימה לא מספיק ותמוגה מובילים לחסימה של עמודת הטיהור.
הצעה: בעת טחינת הרקמה, אנא ודא שהרקמה טחונה מספיק, והעבר אותה במהירות למאגר PSL1 שהוכן מראש (וודא שהפרופורציה הנכונה של β-ME נוספה, ראה שלב 1 של ההליך).
4.הפלט נוסף בצורה שגויה.
הצעה: ודא ש- RNase-Free ddH2O מטפטף לאמצע קרום עמודת הטיהור.
5. הנפח הנכון של אתנול מוחלט לא התווסף למאגר PSL2 או למאגר PRW2.
הצעה: אנא עקוב אחר ההוראות, הוסף את הנפח הנכון של אתנול מוחלט למאגר PSL2 ול-Buffer PRW2 וערבב היטב לפני השימוש בערכה.
6. כמות דגימת הרקמה אינה הולמת.
הצעה: השתמש ב-50 מ"ג של רקמה לכל 500 μl של Buffer PSL1.שימוש בכמות גדולה מדי של רקמה יקטין את כמות ה-RNA המופק וטוהר ה-RNA המתקבל יקטן אף הוא.אנו ממליצים בחום שהמינון הראשוני של הדגימה לא יעלה על 50 מ"ג לכל פעולת מיצוי RNA.
7. נפח חלוקה לא מתאים או שחרור לא שלם.
הצעה: נפח eluent של עמודת הטיהור הוא 50-200 μl;אם אפקט החלוקה אינו משביע רצון, מומלץ להאריך את הזמן בטמפרטורת החדר לאחר הוספת RNase-Free ddH מחומם מראש2הו, כמו 5-10 דקות.
8. בעמודת הטיהור יש שאריות אתנול לאחר שטיפה עם Buffer PRW2.
הצעה: אם הצינור הריק עובר צנטריפוגה למשך דקה ועדיין נותר אתנול לאחר הכביסה במאגר PRW2, אתה יכול להגדיל את זמן הצנטריפוגה של הצינור הריק ל-2 דקות, או למקם את עמודת הטיהור בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להסיר לחלוטין את שאריות האתנול.
9. נעשה שימוש לא נכון בערכה.
הצעה: עבור דגימות צמחים של פוליסכרידים פוליפנוליים, ייתכן ששימוש בערכות נפוצות כגון Plant Total RNA Isolation Kit לא יוכל להשיג דגימות RNA אידיאליות.אנו ממליצים לך להשתמש ב-Plant Total RNA IsolationKit Plus, אשר תוכנן במיוחד עבור דגימות צמחים פוליסכרידים פוליפנוליים.ערכה שפותחה במיוחד להפקת RNA מדגימות צמחי פוליפנול ופוליסכריד.
ערך OD260/OD280 נמוך
דליית RNA עם ddH2O ומשמש לקריאות ספקטרופוטומטר מביא לערכי OD260/OD280 נמוכים.אנו ממליצים להשתמש ב-10 mM Tris-HCl, pH 7.5 (ולא RNase-Free ddH2O כדי להוציא RNA) כדי לקבל ערכי OD260/OD280 נכונים יחסית, ראה "מבחני ריכוז וטיהור RNA" בעמוד 19.
ה-RNA המטוהר מתכלה
איכות ה-RNA המטוהרת קשורה לגורמים כמו שימור דגימות, זיהום RNase ומניפולציה.
ניתוח של סיבות נפוצות:
1. דגימות רקמות לא אוחסנו בזמן לאחר האיסוף.
המלצה: אם לא נעשה שימוש בדגימות הרקמה בזמן לאחר האיסוף, נא לאחסן אותן בחנקן נוזלי בטמפרטורה נמוכה באופן מיידי או להעביר אותן ל-80 מעלות צלזיוס לאחסון לטווח ארוך לאחר הקפאה מהירה בחנקן נוזלי, או לטבול מיד את הדגימות בתמיסת RNAlater מייצב RNA (דגימות מהחי).עבור מיצוי RNA, נסה להשתמש בדגימות רקמה טריות שנאספו.
2. הקפאה והפשרה חוזרת של דגימות רקמה.
הצעה: כשמאחסנים דגימות רקמה, עדיף לחתוך אותן לחתיכות קטנות לשימור, ולהוציא חלק מהן בעת השימוש בהן כדי למנוע פירוק ה-RNA הנגרמת מהקפאה והפשרה חוזרת של הדגימות.
3. RNase מוכנס לחדר הניתוח או לא לובשים כפפות חד פעמיות, מסכות וכו'.
הצעה: ניסויי מיצוי RNA מבוצעים בצורה הטובה ביותר בפעולות RNA נפרדות, ויש לנקות את טבלת המעבדה לפני הניסוי, וללבוש כפפות ומסכות חד פעמיות במהלך הניסוי כדי למנוע פירוק RNA שנגרם מהחדרת RNase במידה רבה ביותר.
4. המגיב מזוהם על ידי RNase במהלך השימוש.
הצעה: החלף בסדרה חדשה של ערכות מיצוי RNA כולל של צמחים לניסויים קשורים.
5. צינורות הצנטריפוגה וקצות הפיפטה המשמשים למניפולציה של RNA מזוהמים עם RNase.
הצעה: ודא שצינורות הצנטריפוגה, קצות הפיפטה, הפיפטות וכו' המשמשים בחילוץ RNA הם כולם ללא RNase.
מדריכי הוראות:
