(96-well) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – Taqman
תיאורים
ה(96-well) QuickEasyTM ערכת Cell Direct RT-qPCR–טקמןמספקמערכת חיץ תמוגה ייחודיתto לשחרר במהירות RNAמתא מתורבתדגימות עבור תגובות RT-qPCR, ביטול זמן רב ומייגעתהליך טיהור RNA, ולוקח רק 7 דקות כדי להשיג את תבנית ה-RNA הנדרשת.ה5× Direct RT Mixו2× Direct qPCR Mix-SYBRמסופק בקופסה יכול במהירות וביעילות להשיג כמותי בזמן אמתתוצאות PCR.
5× Direct RT Mix ו-2× Direct qPCR Mix-Taqman הם בעלי סבילות מעכבת חזקה, והם יכולים להשתמש בליזאט של הדגימה לבדיקה כתבנית לשעתוק הפוך יעיל והגברה ספציפית.המגיב מכיל Foregene Reverse Transcriptase ייחודי עם זיקה גבוהה ל-RNA, כמו גם Hot D-Tak DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , חוצץ תגובה, מייעל PCR ומייצב, וניתן להשתמש בו בשילוב עם חיץ התמוגה כדי לזהות את הדגימה במהירות, בקלות ובדייקנות, ויש לו מאפיינים של רגישות גבוהה, סגוליות חזקה ויציבות טובה.
הערכה מכוונת לתמוגה מיקרו-מערכתית של תאים בתרבית של 96 בארות, ויש לה אחידות ועקביות טובה;רכיבי הערכה מספקים 96 תגובות תמוגה, 96 תגובות שעתוק לאחור ותגובות 96×2 qPCR, שיכולות לפגוש את לוחית התאים עם 96 בארות לשימוש חד פעמי, ולמנוע את הזיהום הנגרם על ידי פתיחה, הקפאה והפשרה חוזרת של ריאגנטים והדרדרות של ביצועי הריאגנטים.
רכיבי ערכה
| הרכב ערכה ( 50 μמערכת תמוגה L/20 μLRT מערכת תגובה /20μמערכת תגובה L qPCR) | DRT-03021 | הֶעָרָה | |
| 96T | |||
| חֵלֶקI | בַּלָםCL | 5 מ"ל | תָאתְמוּגָה |
| פורג'יןפרוטאז פלוס II | 100 μL | ||
| בַּלָםST | 500 μL | ||
| חֵלֶק II | DNAמַחַק | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× מיקס ישיר qPCR-טקמן | 1 מ'L × 2 | qPCR | |
| 50× ROX Reference Dye | 400µL | ||
| RNase- חינםddH2 O | 1.7 מ"ל |
| |
| Mשנתי | 1 לְחַבֵּר | מנה אחת | |
*: מגיב תמוגה DNA Eraser כלול בחלק השני של הערכה;ניתן לרכוש בנפרד רכיבי תזת תאים, RT ו-qPCR.
תכונות ויתרונות
■פשוט ויעיל: עם טכנולוגיית Cell Direct RT, ניתן לקבל דגימות RNA תוך 7 דקות בלבד.
■ הדרישה לדגימה קטנה, ניתן לבדוק עד 10 תאים.
■ תפוקה גבוהה: הוא יכול לזהות במהירות RNA בתאים שתרביתו בצלחות של 384, 96, 24, 12, 6-בארים.
■ DNA Eraser יכול להסיר במהירות גנומים משוחררים, להפחית מאוד את ההשפעה על תוצאות הניסוי הבאות.
■ מערכת RT ו-qPCR אופטימלית הופכת את התעתוק האחורי דו-שלבי RT-PCR ליעיל יותר ול-PCR ספציפי יותר, ועמיד יותר בפני מעכבי תגובה RT-qPCR.
יישום ערכה
היקף היישום: תאים בתרבית.
- RNA משוחרר על ידי תמוגה מדגימה: ישים רק לתבנית RT-qPCR של ערכה זו.
- הערכה יכולה לשמש למטרות הבאות: ניתוח ביטוי גנים, אימות אפקט השתקת גנים בתיווך siRNA, בדיקת תרופות וכו'.
אחסון וחיי מדף
יש לאחסן את חלק I של ערכה זו ב-4℃;יש לאחסן את החלק השני ב-20℃.
יש לאחסן את Foregene Protease Plus II ב-4℃, אין להקפיא ב-20 ℃.
ריאגנט 2×יש לאחסן את Direct qPCR Mix-Taqman ב -20℃בחושך;אם משתמשים בו לעתים קרובות, ניתן לאחסן אותו גם ב-4℃ לאחסון לטווח קצר (השתמש תוך 10 ימים).
עקרונות עיצוב פריימר בזמן אמת PCR
פריימר קדימה ופרימר לאחור
עבור PCR בזמן אמת, עיצוב פריימר חשוב מאוד.פריימרים קשורים לספציפיות וליעילות של הגברה של PCR, וניתן לעצב אותם תוך התייחסות לעקרונות הבאים:
- אורך פריימר: 18-30bp.
- תכולת GC: 40-60%.
- ערך Tm: תוכנת עיצוב פריימר, כמו Primer 5, יכולה לתת את ערך ה-Tm של הפריימר.ערכי ה-Tm של הפריימרים במעלה הזרם והמורד הזרם צריכים להיות קרובים ככל האפשר.ניתן להשתמש גם בנוסחת חישוב Tm: Tm = 4°C (G + C) + 2°C (A + T).בעת ביצוע PCR, טמפרטורה מתחת לערך ה-primer Tm של 5 מעלות צלזיוס נבחרת בדרך כלל כטמפרטורת החישול (העלייה המקבילה בטמפרטורת החישול יכולה להגביר את הספציפיות של תגובת ה-PCR).
- פריימרים ומוצרי PCR:
- אורך המוצר להגברת PCR של פריימר עיצוב הוא רצוי 100-150bp.
- יש להימנע ככל האפשר מפריי תכנון באזור המבני המשני של התבנית.
- הימנע מהיווצרות של 2 או יותר בסיסים משלימים בין קצוות 3′ של פריימרים במעלה הזרם ומורד הזרם.
- בסיס מסוף פריימר 3′ לא יכול להיות קיים עם 3 נוספים G או C רצופים.
- לפריימרים עצמם לא יכולים להיות מבנים משלימים, אחרת יווצר מבנה סיכת ראש, המשפיע על הגברה של PCR.
- יש לפזר את ATCG בצורה שווה ככל האפשר ברצף ה-primer, ויש להימנע מהבסיס המסוף של 3′ כ-T.
נִספָּח1: גell ישירRT-qPCR רכיב ערכהחבילת תוספת לא
1. פתרון תמיסת תאים
| תמיסת ליטוש תאים | |||
| רכיבי ערכה (מערכת תמוגה / באר 24 באר) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| חֵלֶקאני | Buffer CL | 20 מ"ל | 100 מ"ל |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 מ"ל × 2 | |
| Buffer ST | 1 מ"ל × 2 | 10 מ"ל | |
| חֵלֶקII | מחק DNA | 400 μl | 1 מ"ל × 2 |
| RT Mix | |
| רכיבי ערכה (מערכת תגובה של 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH ללא RNase2O | 1.7 מ"ל × 2 |
| מיקס qPCR | ||
| רכיבי ערכה (מערכת תגובה של 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 מ"ל × 2 | 1.7 מ"ל × 6 |
| 20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| ddH ללא RNase2O | 1.7 מ"ל | 10 מ"ל |
מדריכי הוראות:
