ערכת Cell Direct RT qPCR—Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready, בדיקה ערכות qRT-PCR שלב אחד
תיאורים
מוצר זה משתמש במערכת חיץ תמוגה ייחודית לשחרור מהיר של RNA מדגימות תאים מתורבתות עבור תגובות RT-qPCR, תוך ביטול תהליך טיהור RNA שגוזל זמן רב ומייגע, ורק 7 דקות להשגת תבנית ה-RNA הנדרשת, עם 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman המסופקת על ידי הערכה יכולה להשיג תוצאות PCR בזמן אמת במהירות וביעילות.
5× Direct RT Mix ו-2× Direct qPCR Mix-Taqman הם בעלי סבילות מעכבת חזקה ויכולים לבצע היפוך יעיל והגברה ספציפית באמצעות ה-lysate של הדגימה שיש למדוד כתבנית.המגיב מכיל Foregene Reverse Transcriptase, Hot D-Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2, Reaction Buffer, PCR Optimizer ומייצב, אשר ניתן להשתמש בו עם חיץ תמוגה כדי לזהות דגימות במהירות ובקלות, ובעל מאפיינים של רגישות, ספציפיות ויציבות גבוהה.
מפרטים
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
רכיבי ערכה
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| רכיבי ערכה מערכת תגובה qPCR 20μl | DRT-01021 | DRT-01022 | הערה | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
חֵלֶק I | Buffer CL | 4 מ"ל | 20 מ"ל | ליזה של תאים |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Buffer ST | 400 μl | 1 מ"ל × 2 | ||
|
חֵלֶק II | מחק DNA | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 מ"ל × 2 | 1.7 מ"ל × 6 | qPCR | |
| 20×ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl | ||
| ddH ללא RNase2O | 1.7 מ"ל | 10 מ"ל | ||
| מדריך הוראות | 1 חתיכה | 1 חתיכה | ||
*:תזיזת תאים, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman ניתן לרכוש בנפרד
תכונות ויתרונות
■פשוט ויעיל: עם טכנולוגיית Cell Direct RT, ניתן לקבל דגימות RNA תוך 7 דקות בלבד.
■ הדרישה לדגימה קטנה, ניתן לבדוק עד 10 תאים.
■ תפוקה גבוהה: הוא יכול לזהות במהירות RNA בתאים שתרביתו בצלחות של 384, 96, 24, 12, 6-בארים.
■ DNA Eraser יכול להסיר במהירות גנומים משוחררים, להפחית מאוד את ההשפעה על תוצאות הניסוי הבאות.
■ מערכת RT ו-qPCR אופטימלית הופכת את התעתוק האחורי דו-שלבי RT-PCR ליעיל יותר ול-PCR ספציפי יותר, ועמיד יותר בפני מעכבי תגובה RT-qPCR.
יישום ערכה
היקף היישום: תאים בתרבית.
- RNA משוחרר על ידי תמוגה מדגימה: ישים רק לתבנית RT-qPCR של ערכה זו.
- הערכה יכולה לשמש למטרות הבאות: ניתוח ביטוי גנים, אימות אפקט השתקת גנים בתיווך siRNA, בדיקת תרופות וכו'.
אחסון וחיי מדף
יש לאחסן את חלק I של ערכה זו ב-4℃;יש לאחסן את החלק השני ב-20℃.
יש לאחסן את Foregene Protease Plus II ב-4℃, אין להקפיא ב-20 ℃.
ריאגנט 2×יש לאחסן את Direct qPCR Mix-Taqman ב -20℃בחושך;אם משתמשים בו לעתים קרובות, ניתן לאחסן אותו גם ב-4℃ לאחסון לטווח קצר (השתמש תוך 10 ימים).
עקרונות עיצוב פריימר בזמן אמת PCR
פריימר קדימה ופרימר לאחור
עבור PCR בזמן אמת, עיצוב פריימר חשוב מאוד.פריימרים קשורים לספציפיות וליעילות של הגברה של PCR, וניתן לעצב אותם תוך התייחסות לעקרונות הבאים:
- אורך פריימר: 18-30bp.
- תכולת GC: 40-60%.
- ערך Tm: תוכנת עיצוב פריימר, כמו Primer 5, יכולה לתת את ערך ה-Tm של הפריימר.ערכי ה-Tm של הפריימרים במעלה הזרם והמורד הזרם צריכים להיות קרובים ככל האפשר.ניתן להשתמש גם בנוסחת חישוב Tm: Tm = 4°C (G + C) + 2°C (A + T).בעת ביצוע PCR, טמפרטורה מתחת לערך ה-primer Tm של 5 מעלות צלזיוס נבחרת בדרך כלל כטמפרטורת החישול (העלייה המקבילה בטמפרטורת החישול יכולה להגביר את הספציפיות של תגובת ה-PCR).
- פריימרים ומוצרי PCR:
- אורך המוצר להגברת PCR של פריימר עיצוב הוא רצוי 100-150bp.
- יש להימנע ככל האפשר מפריי תכנון באזור המבני המשני של התבנית.
- הימנע מהיווצרות של 2 או יותר בסיסים משלימים בין קצוות 3′ של פריימרים במעלה הזרם ומורד הזרם.
- בסיס מסוף פריימר 3′ לא יכול להיות קיים עם 3 נוספים G או C רצופים.
- לפריימרים עצמם לא יכולים להיות מבנים משלימים, אחרת יווצר מבנה סיכת ראש, המשפיע על הגברה של PCR.
- יש לפזר את ATCG בצורה שווה ככל האפשר ברצף ה-primer, ויש להימנע מהבסיס המסוף של 3′ כ-T.
נִספָּח1: גell ישירRT-qPCR רכיב ערכהחבילת תוספת לא
1. פתרון תמיסת תאים
| תמיסת ליטוש תאים | |||
| רכיבי ערכה (מערכת תמוגה / באר 24 באר) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| חֵלֶקאני | Buffer CL | 20 מ"ל | 100 מ"ל |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 מ"ל × 2 | |
| Buffer ST | 1 מ"ל × 2 | 10 מ"ל | |
| חֵלֶקII | מחק DNA | 400 μl | 1 מ"ל × 2 |
| RT Mix | |
| רכיבי ערכה (מערכת תגובה של 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| ddH ללא RNase2O | 1.7 מ"ל × 2 |
| מיקס qPCR | ||
| רכיבי ערכה (מערכת תגובה של 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 מ"ל × 2 | 1.7 מ"ל × 6 |
| 20× ROX Reference Dye | 40 μl | 200 μl |
| ddH ללא RNase2O | 1.7 מ"ל | 10 מ"ל |
מדריכי הוראות:
