ערכת ישיר RT-qPCR III
תיאור ערכה:
◮ערכת Direct RT-qPCR, באמצעות Foreasy Reverse Transcriptase ו-Foreasy HS Taq DNA Polymerase שפותחה על ידי Foregene, עם חוצץ תגובה ייחודי, הופכת את ערכה זו לעמידות ותאימות חזקה, והיא יכולה לבדוק תגובה ישירות באמצעות מערכת Foregene Lysis כתבנית.ערכה זו יכולה להגיש בקשה לפיתוח ערכת זיהוי חומצות גרעין של COVID-19 וערכת זיהוי חומצות גרעין של חיידקים פתוגניים אחרים.
תיאור
ערכת Direct RT-qPCR מספקת חיץ RT-qPCR ארוז בנפרד (עם Foreasy HS Taq DNA פולימראז מעורב) ויעילForeasy Reverse Transcriptase (MMLV),מה שהופך אותו לנוח ליצירת ערכות אחוריות והתאמת מערכת, תוך אימות פשוט.
ערכת Direct RT-qPCR, באמצעות Foreasy Reverse Transcriptase ו-Foreasy HS Taq DNA Polymerase שפותחה על ידי Foregene, עם חוצץ תגובה ייחודי, הופכת את ערכה זו לעמידות ותאימות חזקה, והיא יכולה לבדוק תגובה ישירות באמצעות מערכת Foregene Lysis כתבנית.ערכה זו יכולה להגיש בקשה לפיתוח ערכת זיהוי חומצות גרעין של COVID-19 וערכת זיהוי חומצות גרעין של חיידקים פתוגניים אחרים.
ערכה זו יכולה להיות ישירות המרכיב של מוצר IVD, באמצעות קל ומהיר.זה רק צריך אימות קל, מבלי להתפתח שוב.
מפרטים
500T, 50,000T
רכיבי ערכה
| תכולת ערכה (מערכת תגובה של 20 μL) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 T | 50,000 T | |
| פורזי רeverse Transcriptase(200 U/μL) | 50 μL×1 | 1 מ"ל×5 |
| 2× ישיר qPCRמיקס-תקמן | 1 מ"ל × 5 | 500 מ"ל×1 |
| הוראה | 1 | 1 |
שלבי הפעלה
ת: הכן את התבנית והריאגנט
1. הכן תבנית RNA מוכנה (מומלץ להשתמש בערכת Foregene Total RNA Isolation Kit לחילוץ ולטהר תבנית RNA) או מוצר לפיצוח דגימה (מומלץ להשתמש במערכת Foregene Lysis), פריימרים ספציפיים (10 מיקרומטר) וחומרים מתכלים רלוונטיים אחרים, מכשיר.
2. הכניסו את מאגר ה-2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O ו-20× ROX Reference Dye (אם יש צורך) בקופסה עם קרח, מה שהופך אותם להימס באופן טבעי ולערבב בעדינות.
ב: הכנת מערכת RT-qPCR
קבל חצי מנפח מאגר התגובה של מערכת התגובה (לדוגמה, אם נפח המערכת הוא 20 מיקרוגל, היא צריכה לקבל 10 מיקרוליטר 2× מאגר ישיר RT-qPCR). לכמות מתאימה של אנזים, אנו מציעים זאתM-MLV：10-30 U/20 μL מערכת תגובה,טאקDNA פולימראז:מערכת תגובה 1-2 U/20 μLזו ההצעה שלנו, כדאי לבדוק ולהתאים אותה), הוסף תבנית RNA, פריימרים ובדיקות ספציפיות והוסף DDH ללא RNase2O עד 20 μL.ניתן להפנות את ההכנה הספציפית של מערכת התגובה RT-qPCR לטבלה הבאה 1.
טבלה 1: הכנת מערכת RT-qPCR
| רְכִיב | כרך | ריכוז סופי |
| 2× מאגר RT-qPCR ישיר | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA Polymerase | 1-2 U | |
| פריימר קדימה (10 מיקרומטר) | 0.8 μL | 50-900nM |
| פריימר הפוך (10 מיקרומטר) | 0.8 μL | 50-900nM |
| בדיקה (4 מיקרומטר) | 1 μL | 200 ננומטר |
| תבנית (RNA או Lysate) | X μL | |
| 20× ROX Reference Dye | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X) μL | |
| נפח כולל | 20 μL |
הערה: פריימר קדימה ו-Reverse Primer הם פריימרים ספציפיים של גן המטרה.ניתן להתאים את מערכת ה-qPCR לפי מודלים ניסיוניים ו-PCR מעשיים.אנו ממליצים על 400nM עבור הריכוז הסופי של רוב הפריימרים.התאם את נפח הפריימרים והפרובים הספציפיים בהתאם לריכוז המוכן ולריכוז הסופי המומלץ, בבקשה.
1*: בחר ריכוז סופי מתאים של ROX Reference Dye בהתאם למכשירי PCR כמותיים שונים.הריכוז האופטימלי ROX Reference Dye של מכשירי PCR כמותיים נפוצים מוצג בטבלה הבאה:
| מכשירי PCR כמותיים | ריכוז סופי של ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/שלב ראשון,וכו ' | 1× (לדוגמה, הוסף 1μl 20×ROX Reference Dye במערכת תגובה של 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P ו-Mx4000 וכו'. | 0.5× (לדוגמה, הוסף 0.5μl 20×ROX Reference Dye במערכת תגובה של 20 μL) |
| מכשיר PCR Roche, מכשיר Bio-Rad PCR, מכשיר PCR כמותי של Eppendorf וכו'. | ללא ROX Reference Dye |
אחסון וחיי מדף
יש לאחסן את הערכה ב-20 ± 5℃.יש לאחסן אותו מיד במקרר תרמוסטטי -20℃.תקופת התוקף היא שנתיים אם הוא מאוחסן במצב מתאים.
