ערכת בידוד דנ"א ו-RNA ויראלית ערכות הכנה לטיהור מיצוי DNA ו-RNA ויראלי
מפרטים
50 הכנות, 200 הכנות
ערכת בידוד של חומצת גרעין של RNA ויראלית משתמשת בעמודת הספין ובנוסחה שפותחה על ידי Foregene, שיכולה לחלץ ביעילות RNA ויראלי בטוהר גבוה ואיכותי מדגימות כגון פלזמה, סרום, נוזל גוף נטול תאים וסופרנטנט תרבית תאים.הערכה מוסיפה במיוחד Linear Acrylamide, שיכול בקלות ללכוד כמויות קטנות של RNA מהדגימות.עמודת RNA בלבד יכולה לקשור RNA ביעילות.הערכה יכולה לעבד מספר רב של דגימות בו זמנית.
הערכה כולה אינה מכילה RNase, כך שה-RNA המטוהר לא יתפרק.Buffer viRW1 ו-Buffer viRW2 יכולים להבטיח שחומצת הגרעין הוויראלית המתקבלת נקייה מחלבון, נוקלאז או זיהומים אחרים, אשר יכולה לשמש ישירות לניסויים בביולוגיה מולקולרית במורד הזרם.
רכיבי ערכה
| אקרילאמיד ליניארי |
| חוצץ DRL |
| מאגר RW1, מאגר RW2 |
| ddH ללא RNase2O |
| עמודת DNA/RNA |
| הוראות |
תכונות ויתרונות
■ פעולה בטמפרטורת החדר (15-25℃) לאורך כל התהליך, ללא אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה.
■ ערכה מלאה ללא RNase, אין צורך לדאוג לפירוק RNA.
■ תפוקה גבוהה של חומצת גרעין: DNA/RNA בלבד עמודה ונוסחה ייחודית יכולים לטהר ביעילות DNA ו-RNA.
■ קיבולת עיבוד דגימה גדולה: ניתן לעבד עד 200μl דגימות בכל פעם.
■ מהירות מהירה: קל לתפעול וניתן להשלים תוך 20 דקות.
■ בטיחות: אין צורך בריאגנט אורגני.
■ איכות גבוהה: שברי ה-RNA המטוהרים הינם בטוהר גבוה, ללא חלבון וזיהומים אחרים, ויכולים לעמוד ביישומים ניסויים שונים במורד הזרם.
יישום ערכה
זה מתאים למיצוי וטיהור של חומצת גרעין ויראלית בדגימות כמו פלזמה, סרום, נוזל גוף נטול תאים וסופרנטנט תרבית תאים.
זרימת עבודה
תרשים
אחסון וחיי מדף
■ ניתן לאחסן ערכה זו למשך 24 חודשים בתנאים יבשים בטמפרטורת החדר (15-25℃);אם יש צורך לאחסן אותו לזמן ארוך יותר, ניתן לאחסן אותו בטמפרטורה של 2-8 מעלות צלזיוס.
■ תמיסת אקרילאמיד לינארית ניתן לאחסן בטמפרטורת החדר למשך 7 ימים;לאחר קבלת הערכה, נא להוציא אותה ולאחסן אותה ב-20 מעלות צלזיוס.
■ לאחר הוספת Linear Acrylamide למאגר DRL, ניתן לאחסן אותו ב-2-8 מעלות צלזיוס עד 48 שעות.אנא השתמש בפתרון המוכן.
מדריך לניתוח בעיות
להלן ניתוח של הבעיות שעלולות להיתקל בחילוץ של DNA/RNA ויראלי, בתקווה להיות מועיל לניסויים שלך.בנוסף, עבור בעיות ניסיוניות או טכניות אחרות מלבד הוראות הפעלה וניתוח בעיות, יש לנו תמיכה טכנית ייעודית כדי לעזור לך.אם יש לך צרכים, אנא צור איתנו קשר: 028-83360257 או דואר אלקטרוני:
Tech@foregene.com.
אין מיצוי חומצת גרעין או תפוקה נמוכה של חומצת גרעין
בדרך כלל ישנם גורמים רבים המשפיעים על יעילות ההתאוששות, כגון: תכולת חומצת גרעין בדגימה, שיטת הפעולה, נפח הפליטה וכו'.
ניתוח של סיבות נפוצות:
1. במהלך ההליך בוצעה אמבט קרח או צנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה (4 מעלות צלזיוס).
הצעה: פעל בטמפרטורת החדר (15-25 מעלות צלזיוס) לאורך כל התהליך, אל תעשה אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה.
2. הדגימה אוחסנה בצורה לא נכונה או שהדגימה אוחסנה זמן רב מדי.
המלצה: אחסן דגימות ב-80°C והימנע מהקפאה והפשרה חוזרות;נסה להשתמש בדגימות טריות שנאספו לצורך מיצוי חומצת גרעין.
3. תמוגה לא מספקת של דגימה.
המלצה: אנא ודא שהדגימה ותמיסת העבודה התמוגגת מעורבבים היטב ומודגרים בטמפרטורת החדר (15-25 מעלות צלזיוס) למשך 10 דקות.
4. הוספה שגויה של מחלל.
הצעה: ודא ש-RNase-Free ddH2O מתווסף בצורה טיפה לאמצע קרום עמוד הטיהור, ואל תפיל אותו על טבעת עמודת הטיהור.
5. הנפח הנכון של אתנול מוחלט לא התווסף למאגר RW2.
הצעה: אנא עקוב אחר ההוראות, הוסף את הנפח הנכון של אתנול מוחלט למאגר RW2 וערבב היטב לפני השימוש בערכה.
6. נפח דגימה לא מתאים.
הצעה: 200 µl של דגימה מעובד עבור כל 500 µl של Buffer DRL.עיבוד מוגזם של דגימות יביא לתפוקת מיצוי חומצת גרעין נמוכה יותר.
7. נפח חלוקה לא מתאים או שחרור לא שלם.
המלצה: נפח ההחלפה של עמודת הטיהור הוא 30-50μl;אם אפקט האלוציה אינו משביע רצון, מומלץ להאריך את הזמן בטמפרטורת החדר לאחר הוספת RNase-Free ddH2O מחומם מראש, כגון 5-10 דקות.
8. אתנול נשאר על העמוד לאחר כביסה עם Buffer RW2.
הצעה: אם נשאר אתנול לאחר צנטריפוגה עם Buffer RW2 למשך 2 דקות, ניתן למקם את העמודה בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות לאחר הצנטריפוגה כדי להסיר לחלוטין שאריות אתנול.
חומצת הגרעין המטוהרת מתכלה
איכות חומצת הגרעין המטוהרת קשורה לשימור הדגימה, זיהום RNase, פעולה וגורמים נוספים.ניתוח של סיבות נפוצות:
1. הדגימות שנאספו לא אוחסנו בזמן.
הצעה: אם לא נעשה שימוש בדגימה בזמן לאחר האיסוף, נא לאחסן אותה מיד בטמפרטורה של -80 מעלות צלזיוס בטמפרטורה נמוכה.עבור מיצוי RNA, נסה להשתמש בדגימות טריות שנאספו.
2. אוספים דגימות ומקפיאים ומפשירים שוב ושוב.
הצעה: הימנע מהקפאה והפשרה (לא יותר מפעם אחת) במהלך איסוף ואחסון הדגימות, אחרת תפוקת חומצת הגרעין תפחת.
3. RNase מוכנס לחדר הניתוח או שלא לובשים כפפות חד פעמיות, מסכות וכו'.
המלצה: ניסויי מיצוי RNA מבוצעים בצורה הטובה ביותר בחדר ניתוח RNA נפרד, ויש לנקות את טבלת המעבדה לפני הניסוי.
ללבוש כפפות ומסכות חד-פעמיות במהלך הניסוי כדי למנוע פירוק RNA שנגרם על ידי החדרת RNase במידה רבה ביותר.
4. המגיב היה מזוהם ב-RNase במהלך השימוש.
המלצה: החלף בערכת בידוד DNA/RNA ויראלית חדשה עבור ניסויים קשורים.
5. צינורות הצנטריפוגה וקצות הפיפטה המשמשים למניפולציה של RNA מזוהמים ב-RNase.
הצעה: ודא שצינורות הצנטריפוגה, קצות הפיפטה, הפיפטות וכו' המשמשים למיצוי RNA כולם ללא RNase.
חומצת גרעין מטוהרת משפיעה על ניסויים במורד הזרם
DNA ו-RNA מטוהרים על ידי עמודת הטיהור, אם תכולת יוני המלח והחלבון גבוהים מדי, זה ישפיע על הניסויים במורד הזרם, כגון: הגברה של PCR, שעתוק לאחור וכו'.
1. ל-DNA ול-RNA שנפלטו יש שאריות יוני מלח.
הצעה: ודא שהנפח הנכון של אתנול מוחלט מתווסף למאגר RW2, ושטוף את עמודת הטיהור פעמיים במהירות הצנטריפוגה המצוינת בהוראות ההפעלה;בצע צנטריפוגה כדי למזער את זיהום יוני המלח.
2. ל-DNA ול-RNA שנפלטו יש שאריות אתנול.
הצעה: לאחר אישור הכביסה עם Buffer RW2, בצע צנטריפוגה של צינור ריק במהירות הצנטריפוגה בהוראות ההפעלה;אם עדיין יש שאריות אתנול, אתה יכול לצנטריפוגה את הצינור הריק ולאחר מכן להניח אותו בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להסיר את שאריות האתנול במידה הרבה ביותר.
מדריכי הוראות:
מדריך הוראות ערכת בידוד DNA&RNA ויראלי
