ערכת בידוד DNA צמחית גנומית ערכות לטיהור DNA של צמח פרוטוקול ריאגנטים
מפרטים
50 הכנות, 100 הכנות, 250 הכנות
ערכה זו משתמשת בעמודת DNA בלבד שיכולה לקשור באופן ספציפי DNA, Foregene protease ומערכת חיץ ייחודית, אשר מפשטת מאוד את הטיהור של DNA גנומי צמחי.ניתן להשיג DNA גנומי באיכות גבוהה תוך 30 דקות, מה שמונע את השפלה של DNA גנומי.
קרום סיליקה ג'ל בלבד ב-DNA המשמש בעמודת הספין הוא החומר החדש והייחודי של Foregene, שיכול להיקשר ביעילות ובאופן ספציפי ל-DNA, ולמקסם את הסרת ה-RNA, חלבוני טומאה, יונים, פוליסכרידים, פוליפנולים ותרכובות אורגניות אחרות.
רכיבי מוצר
| מאגר PL1, מאגר PL2 |
| Buffer PW, Buffer WB, Buffer EB |
| Foregene Protease |
| עמודת DNA בלבד |
| הוראות |
תכונות ויתרונות
■ ללא זיהום RNase: עמודת ה-DNA בלבד המסופקת על ידי הערכה מאפשרת להסיר RNA מ-DNA גנומי ללא RNase נוסף במהלך הניסוי, ומונעת מהמעבדה להיות מזוהמת על ידי RNase אקסוגני.
■ מהירות מהירה: ל-Foregene Protease פעילות גבוהה יותר מפרוטאזות דומות ומעכל דגימות רקמה מהר יותר.
■ פשוט: ניתן להשלים את פעולת מיצוי ה-DNA הגנומי תוך 30 דקות.
■ נוח: הצנטריפוגה מתבצעת בטמפרטורת החדר, אין צורך בצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה של 4℃ או משקעים אתנול של DNA.
■ בטיחות: אין צורך בריאגנט אורגני.
■ איכות גבוהה: ל-DNA הגנומי המטוהר יש שברים גדולים, ללא RNA, ללא RNase ותכולת יונים נמוכה במיוחד, שיכולים לעמוד בדרישות של ניסויים שונים.
יישום ערכה
מתאים למיצוי וטיהור של DNA גנומי מרקמות צמחים טריות או קפואות.
זרימת עבודה
תרשים
אחסון וחיי מדף
ניתן לאחסן את הערכה למשך 12 חודשים בטמפרטורת החדר (15-25 ℃) ו-2-8 ℃ למשך זמן רב יותר.
לתמיסת Foregene Protease Plus יש נוסחה ייחודית, הפעילה באחסון בטמפרטורת החדר לאורך זמן (3 חודשים);הפעילות והיציבות שלו יהיו טובים יותר כאשר יאוחסנו ב4℃, לכן מומלץ לאחסן אותו ב-4℃, זכור לא לאחסן ב-20℃.
מדריך לניתוח בעיות
The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.
תשואה נמוכה או ללא DNA
בדרך כלל ישנם גורמים רבים המשפיעים על תפוקת ה-DNA הגנומי, ביניהם מקור הדגימה, גיל הדגימה, תנאי האחסון של הדגימה והפעולה.
לא ניתן היה להשיג DNA גנומי במהלך מיצוי
1. דגימות הרקמה מאוחסנות בצורה לא נכונה או מאוחסנות זמן רב מדי, וכתוצאה מכך הפירוק של ה-DNA הגנומי.
המלצה: אחסן דגימות רקמה בחנקן נוזלי או -20°ג;נסו להשתמש בדגימות שנאספו לאחרונה לצורך מיצוי DNA גנומי.
2. כמות קטנה מדי של דגימה עלולה לגרום לכך שה-DNA הגנומי המתאים לא יופק.
הצעה: עבור דגימות רקמה שנשמרו במשך זמן רב או שיש להן פירוק DNA גנומי חמור, ניתן להגדיל את כמות דגימות הרקמה כראוי על מנת להוציא DNA גנומי ניכר.ניתן לקבוע את כמות הדגימה בהתאם לצרכי ה-DNA, אך הדגימה הטרייה לא תעלה על 100 מ"ג, והדגימה היבשה לא תעלה על 30 מ"ג.
3. הדגימה לא נטחנת בחנקן נוזלי או מונחת זמן רב מדי לאחר חנקן נוזלי.
הצעה: במהלך מיצוי ה-DNA, הדגימה צריכה להיות טחונה במלואה עם חנקן נוזלי כדי לשבור את דופן התא;לאחר הטחינה, נא להעביר את אבקת המדגם ל-PL1 שחומם מראש ל-65°C בהקדם האפשרי (ברגע שהאבקה הטחונה תימס, ה-DNA הגנומי יתחיל להתפרק במהירות).
4. אחסון לא נכון של Foregene Protease גורם לפעילות מופחתת או מושבתת.
המלצה: אשר את תנאי האחסון של Foregene Protease או החלף אותו ב-Foregene Protease חדש להידרוליזה אנזימטית.
5. הערכה מאוחסנת בצורה לא נכונה או מאוחסנת זמן רב מדי, מה שגורם לכשל של רכיבים בערכה.
המלצה: רכשו ערכת מיצוי DNA גנומי צמחית חדשה עבור פעולות קשורות.
6. שימוש לא נכון בערכה.
הצעה: רכוש ערכת בידוד DNA צמחית המוקדשת לדגימות למיצוי וטיהור של DNA גנומי צמחי.
7. מאגר WB ללא הוספת אנטול מים אתנול.
המלצה: הקפד להוסיף את הנפח הנכון של אתנול מוחלט למאגר WB.
8. המסיר לא הוטפטף על ממברנת הסיליקה בצורה נכונה.
הצעה: הוסף את חומר ההסרה שחומם מראש ל-65℃טיפה לאמצע ממברנת סיליקה ג'ל, והשאירו אותו בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להגביר את יעילות הפליטה.
מיצוי לקבלת DNA גנומי בעל תשואה נמוכה
1. הדגימה מאוחסנת בצורה לא נכונה או מאוחסנת זמן רב מדי, וכתוצאה מכך הפירוק של ה-DNA הגנומי.
המלצה: אחסן דגימות רקמה ב-20-℃;נסו להשתמש בדגימות רקמה שנאספו לאחרונה לצורך מיצוי DNA גנומי.
2. אם כמות דגימות הרקמה קטנה מדי, ה-DNA הגנומי המופק יהיה קטן יותר.
הצעה: חלק מדגימות הצמחים עשירות במים, כמו צמחי מים כמו אצות וכדומה, ניתן להעלות את המינון בצורה מתאימה או להתייבש מעט לפני הניתוח.
3. הדגימות לא נטחנו ביסודיות בחנקן נוזלי או שהושארו בטמפרטורת החדר זמן רב מדי לאחר הטחינה.
הצעה: טחינת החנקן הנוזלי חייבת להיות מספקת, ויש לשבור את דופן התא המדגם ככל האפשר;מיד לאחר הטחינה יש להעביר את אבקת הדגימה ל-65℃מאגר PL1 מחומם מראש לשלב הבא.
4. לא משתמשים בערכה הנכונה.
המלצה: השתמש בערכה ייעודית לבידוד DNA של צמחים כדי לחלץ ולטהר DNA גנומי צמחי.
5. אחסון לא נכון של Foregene Protease גורם לפעילות מופחתת או מושבתת.
המלצה: אשר את תנאי האחסון של Foregene Protease או החלף אותו ב-Foregene Protease חדש להידרוליזה אנזימטית.
6. בעיית סלק
המלצה: אנא השתמש ב-Buffer EB עבור elution;אם משתמשים ב-ddH2O או חומרי eluent אחרים, ודא שה-pH של eluent הוא בין 7.0-8.5.
7. המסיר לא מטפטף בצורה נכונה
הצעה: נא להוסיף את טיפת החליפה לאמצע ממברנת הסיליקה ולהשאיר אותה בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להגביר את יעילות הפליטה.
8. נפח ההחלפה קטן מדי
הצעה: אנא השתמשו במסיר עבור פליטת DNA גנומי לפי ההוראות, לפחות לא פחות מ-100μl.
מופק DNA גנומי בטוהר נמוך
הטוהר הנמוך של ה-DNA הגנומי יוביל לכישלון או להשפעה ירודה של ניסויים במורד הזרם, כגון: לא ניתן לחתוך את האנזים, ולא ניתן להשיג את קטע גן המטרה באמצעות PCR.
1. זיהום חלבון שונה, זיהום RNA.
ניתוח: Buffer PW לא שימש לשטיפת העמוד;Buffer PW לא שימש לשטיפת העמוד במהירות הצנטריפוגה הנכונה.
הצעה: נסו לוודא שאין משקעים בסופרנטנט כאשר הסופרנטנט מועבר דרך העמוד;הקפד לשטוף את עמודת הטיהור עם Buffer PW לפי ההוראות, ולא ניתן לוותר על שלב זה.
2. זיהום יונים טומאה.
ניתוח: עמודת השטיפה של Buffer WB הושמטה או נשטפה רק פעם אחת, וכתוצאה מכך נשאר זיהום יוני.
המלצה: הקפידו לשטוף פעמיים עם Buffer WB לפי ההוראות כדי להסיר שאריות יונים ככל האפשר.
3. זיהום RNase.
ניתוח: RNase אקסוגני מתווסף למאגר;פעולת כביסה שגויה ב-Buffer PW תגרום לשאריות של RNase ותשפיע על פעולות נסיוניות של RNA במורד הזרם, כגון שעתוק חוץ גופית.
הצעה: ערכות מיצוי חומצות גרעין מסדרת Foregene יכולות להסיר RNA ללא RNase נוסף, וכל הריאגנטים בערכת בידוד DNA של צמחים אינם זקוקים ל-RNase;הקפד לשטוף את עמודת הטיהור עם Buffer PW לפי ההוראות, ולא ניתן לוותר על שלב זה.
4. שאריות אתנול.
ניתוח: לאחר שטיפת עמודת הטיהור עם Buffer WB, לא בוצעה צנטריפוגה של צינור ריק.
המלצה: עקוב אחר ההוראות לצנטריפוגה נכונה של צינור ריק.
מדריך הוראות:
מדריך הוראות ערכת בידוד DNA של צמחים
