מדריכים לניתוח בעיות

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

לא ניתן לחלץ RNA או שהתשואה של חומצת גרעין נמוכה

בדרך כלל ישנם גורמים רבים המשפיעים על יעילות ההתאוששות, כגון: תכולת RNA בדגימה, שיטת הפעולה, נפח הפליטה וכו'.

ניתוח סיבות נפוצות:

1. אמבט קרח או צנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה (4 מעלות צלזיוס) במהלך הפעולה.

הצעה: פעולה בטמפרטורת החדר (15-25 מעלות צלזיוס), לעולם לא אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה.

2. אחסון דגימות לא תקין או אחסון דגימות זמן רב מדי.

הצעה: אחסן דגימות ב-80 מעלות צלזיוס או הקפאה בחנקן נוזלי, והימנע משימוש חוזר בהקפאה-הפשרה;נסה להשתמש בדגימות טריות שנאספו לצורך מיצוי RNA.

3. תמוגה מדגם לא מספיק

המלצה: אנא ודא שהדגימה ותמיסת העבודה (אקרילאמיד לינארי) עורבבו היטב והודגרו במשך 10 דקות בטמפרטורת החדר (15-25 מעלות צלזיוס)

4.הפלט נוסף בצורה שגויה

המלצה: ודא ש- RNase-Free ddH2O מתווסף לאמצע הממברנה של עמודת הטיהור

5. נפח לא תקין של אתנול נטול מים ב Buffer viRW2

הצעה: אנא עקוב אחר ההוראות, הוסף את הנפח הנכון של אתנול נטול מים למאגר viRW2 וערבב אותם היטב לפני השימוש בערכה.

6. שימוש לא תקין במדגם.

הצעה: 200µl של דגימה לכל 500μl של Buffer viRL.נפח דגימה מוגזם יגרום להפחתת קצב מיצוי ה-RNA.

7. נפח חלוקה לא תקין או שחרור לא שלם.

הצעה: נפח eluent של עמודת הטיהור הוא 30-50μl;אם אפקט האלוציה אינו משביע רצון, מומלץ להוסיף RNase-Free ddH מחומם מראש₂O ולהאריך את הזמן מיקום בטמפרטורת החדר, כגון 5-10 דקות

8. טור טיהור יש שאריות אתנול לאחר שטיפה ב Buffer viRW2.

הצעה: אם עדיין נשאר אתנול לאחר שטיפה ב-Buffer viRW2 וצנטריפוגה של צינור ריק למשך 2 דקות, ניתן להשאיר את עמודת הטיהור בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות לאחר צנטריפוגה של צינור ריק כדי להסיר לחלוטין את שאריות האתנול.

הפירוק של מולקולות RNA מטוהרות

איכות ה-RNA המטוהרת קשורה לגורמים כמו אחסון דגימות, זיהום RNase ותפעול.

ניתוח סיבות נפוצות:

1. הדגימות שנאספו לא נשמרו בזמן.

הצעה: אם הדגימה אינה בשימוש בזמן לאחר האיסוף, נא לאחסן אותה ב-80 ℃ או בחנקן נוזלי מיד.עבור מיצוי מולקולות RNA, נסה להשתמש בדגימות טריות שנאספו במידת האפשר.

2. דגימות שנאספו הוקפאו והפשרו שוב ושוב.

הצעה: הימנע מהקפאה והפשרה חוזרות ונשנות (לא יותר מפעם אחת) במהלך איסוף ואחסון הדגימות, אחרת התפוקה של חומצת גרעין תפחת.

3.RNase הוכנס לחדר הניתוח או שלא לבשו כפפות חד פעמיות, מסכות וכו'.

הצעה: ניסוי המיצוי של מולקולות RNA מתבצע בצורה הטובה ביותר בחדר ניתוח RNA נפרד, ואת טבלת הניסוי מנקים לפני הניסוי.ללבוש כפפות ומסכות חד פעמיות במהלך הניסוי כדי למנוע פירוק RNA שנגרם על ידי החדרת RNase.

4. המגיב מזוהם על ידי RNase במהלך השימוש.

הצעה: החלף בערכת בידוד RNA ויראלית חדשה עבור ניסויים קשורים.

5. זיהום RNase של צינורות הצנטריפוגה, קצות הפיפטה וכו'. הצעה: ודא שצינורות הצנטריפוגה, קצות הפיפטה והפיפטות כולם ללא RNase.

מולקולות ה-RNA המטוהרות השפיעו על ניסויים במורד הזרם

מולקולות ה-RNA המטוהרות על ידי עמודת הטיהור ישפיעו על ניסויים במורד הזרם אם יש יותר מדי יוני מלח או חלבונים, כגון: שעתוק לאחור, Northern Blot וכו'.

1. נותרו יוני מלח במולקולות ה-RNA שנפלטו.

המלצה: וודאו שהנפח הנכון של אתנול נטול מים נוספה ל-Buffer viRW2, ושטפו את עמודת הטיהור פעמיים לפי מהירות הצנטריפוגה הנכונה בהוראות ההפעלה; אם עדיין נותרו יוני מלח, ניתן להוסיף Buffer viRW2 לעמודת הטיהור, ולהשאיר אותו בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות.לאחר מכן בצע צנטריפוגה כדי להסיר זיהום יוני מלח במידה הרבה ביותר

2. נותרו אתנול במולקולות ה-RNA הנפלטות

הצעה: לאחר אישור שעמודות הטיהור נשטפו על ידי Buffer viRW2, בצע צנטריפוגה של צינור ריק בהתאם למהירות הצנטריפוגלית בהוראות ההפעלה.אם עדיין נשאר אתנול, ניתן להשאיר אותו למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר לאחר צנטריפוגה של צינור ריק כדי להסיר את האתנול הנותר במידה הרבה ביותר.

מדריכי הוראות:

מדריך הוראות לערכת בידוד RNA ויראלי