ערכת בידוד דנ"א בוקלית/כרטיס FTA ערכת מיצוי DNA גנומי או ערכת טיהור מספוגיות בוקאליות
תיאור ערכה:
טהר במהירות DNA גנומי באיכות גבוהה מדגימות ספוגית חזה/FTA Card.
◮אין זיהום RNase:עמודת ה-DNA בלבד שמספקת הערכה מאפשרת להסיר את ה-RNA מה-DNA הגנומי מבלי להוסיף RNase במהלך הניסוי, ומונעת מהמעבדה להיות מזוהמת על-ידי RNase אקסוגני.
◮מהירות גבוהה:Foregene Protease הוא בעל פעילות גבוהה יותר מאשר פרוטאזות דומות, והוא מעכל דגימות רקמה במהירות;הפעולה פשוטה, וניתן להשלים את פעולת מיצוי ה-DNA הגנומי תוך 20-80 דקות.
◮נוֹחַ:הצנטריפוגה מתבצעת בטמפרטורת החדר, ואין צורך בצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה של 4 מעלות צלזיוס או משקעים אתנול של DNA.
◮בְּטִיחוּת:אין צורך במיצוי ריאגנטים אורגניים.
◮איכות גבוהה:ל-DNA הגנומי המופק יש שברים גדולים, ללא RNA, ללא RNase ותכולת יונים נמוכה במיוחד, שיכולה לעמוד בדרישות של ניסויים שונים.
◮מערכת מיקרו-פליטה:זה יכול להגביר את ריכוז ה-DNA הגנומי, וזה נוח לגילוי או ניסוי במורד הזרם.
תיאור
ערכה זו מספקת שיטה יעילה ומהירה להשגת DNA גנומי בריכוז גבוה מספוגיות בוקאליות וכרטיס FTA (כתמי דם).שימוש בחברה שלנו'עמודת הספין והנוסחה הייחודית של ממברנת סיליקה של DNA בלבד, בשילוב עם Foregene Protease, ניתן לחלץ DNA גנומי בריכוז גבוה ואיכותי תוך 80 דקות.עמודת הטיהור הקטנה שתוכננה במיוחד קושרת DNA גנומי, וניתן לפלוט את ה-DNA עם כמות קטנה (15μl) מערכת elution כדי להגדיל את ריכוז ה-DNA הגנומי המתקבל, וזה נוח לגילוי או ניסוי במורד הזרם.הערכה יכולה לעבד דגימה אחת או יותר בכל פעם, ותהליך הטיהור אינו מצריך מיצוי של חומרים אורגניים כמו פנול, כלורופורם ומשקעי איזופרופנול או אתנול שגוזלים זמן, והפעולה פשוטה וחוסכת זמן.
מפרטים
50 הכנות
רכיבי ערכה
| מאגר ST1 |
| מאגר ST2 |
| אקרילאמיד ליניארי |
| Buffer PW |
| חוצץ WB |
| Buffer EB |
| Foregene Protease |
| עמודת DNA בלבד |
| הוראות |
תכונות ויתרונות
-ללא זיהום RNase: עמודת ה-DNA בלבד המסופקת על ידי הערכה מאפשרת להסיר RNA מ-DNA גנומי מבלי להוסיף RNase במהלך הניסוי, ולמנוע מהמעבדה להיות מזוהמת על ידי RNase אקסוגני.
-מהירות מהירה: ל-Foregene Protease פעילות גבוהה יותר מפרוטאזות דומות, מעכל דגימות במהירות;פעולה פשוטה.
-נוח: הצנטריפוגה מתבצעת בטמפרטורת החדר, ואין צורך בצנטריפוגה בטמפרטורה נמוכה של 4 מעלות צלזיוס או משקעים אתנול של DNA.
-בטיחות: אין צורך במיצוי ריאגנטים אורגניים.
-איכות גבוהה: ל-DNA הגנומי המופק יש שברים גדולים, ללא RNA, ללא RNase ותכולת יונים נמוכה במיוחד, שיכולה לעמוד בדרישות של ניסויים שונים.
-מערכת מיקרו-אלוציה: היא יכולה להגביר את ריכוז ה-DNA הגנומי, וזה נוח לגילוי או ניסוי במורד הזרם.
יישום ערכה
זה מתאים לטיהור של DNA גנומי מהדגימות הבאות: ספוגיות בוקאליות, כרטיס FTA (כתמי דם).
אחסון וחיי מדף
-ערכה זו יכולה להיות מאוחסנת למשך 12 חודשים בתנאים יבשים בטמפרטורת החדר (15-25 מעלות צלזיוס);אם צריך לאחסן אותו לפרק זמן ארוך יותר, ניתן לאחסן אותו ב-2-8 מעלות צלזיוס.
הערה: אם מאוחסנים בטמפרטורה נמוכה, התמיסה נוטה למשקעים.לפני השימוש, הקפד להניח את התמיסה בערכה בטמפרטורת החדר למשך פרק זמן.במידת הצורך, חממו אותו מראש באמבט מים של 37 מעלות צלזיוס למשך 10 דקות כדי להמיס את המשקעים, וערבבו אותו לפני השימוש.
-תמיסת Foregene Protease יש נוסחה ייחודית, הפעילה כאשר היא מאוחסנת בטמפרטורת החדר למשך זמן רב (3 חודשים);הפעילות והיציבות שלו יהיו טובים יותר באחסון ב-4°C, לכן מומלץ לאחסן אותו ב-4°C, זכרו לא לשמור אותו ב-20°C.
עמוד הטיהור סתום
בערכה זו, בפעולת מיצוי ה-DNA הגנומי, עמודת הטיהור נספגת ישירות על תערובת התמוגה האנזימטית של הדגימה ללא שלב צנטריפוגה, ועמודת הטיהור עלולה להיחסם עקב אנזיזציה לא מלאה וצמיגות גבוהה של הדגימה.
הגורמים האפשריים הבאים הם כדלקמן:
1. עיכול אנזימטי לא שלם של דגימות רקמה.
המלצה: ניתן להאריך כראוי את זמן עיבוד הדגימה של Foregene Protease או שניתן לקחת את הסופרנטנט לאחר צנטריפוגה ב-12,000 סל"ד (~13,400 × גרם) למשך 5 דקות.
2. שימוש מופרז בדגימות רקמה או רקמות גדולות.
המלצה: עדיף לא לחרוג מ-1 ספוגית בוקאלית בדגימה;אם המדגם גדול מדי, הגדל את המינון של Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 בהתאם.
3. צמיגות המדגם גבוהה מדי.
המלצה: ניתן לדלל דגימות כראוי עם 10 מ"מ של Tris-HCl לפני מיצוי DNA גנומי.
4. שברי כרטיס הדם נשאבו.
המלצה: ניתן להאריך כראוי את זמן הצנטריפוגה החולף של שלב 6 של מיצוי גנומי של כתמי דם (כרטיס FTA).
תשואה נמוכה או ללא DNA
לעתים קרובות ישנם מגוון גורמים המשפיעים על תפוקת ה-DNA הגנומי, כולל מקור הדגימה, תנאי אחסון הדגימה, הכנת הדגימה, מניפולציה וכו'.
לא ניתן להשיג DNA גנומי במהלך מיצוי
הגורמים האפשריים הם כדלקמן:
1. שימור לא נכון של דגימות או אחסון לאורך זמן מוביל לפירוק DNA גנומי.
המלצה: רצוי לדגום ספוגיות אוראלי טריות, ולא כדאי להשתמש בספוגיות משומרות לפעולות מיצוי DNA גנומי;דגימות כתמי דם צריכות להבטיח שהאיכות מוסמכת ושזמן האחסון לא צריך להיות ארוך מדי.
2. שימוש מועט מדי ברקמות עלול לגרום ללא מיצוי של ה-DNA הגנומי המתאים.
המלצה: עקבו אחר הוראות דגימת הספוגית הבוקאלית במדריך ההפעלה, ונגבו כמה שיותר פעמים כדי שניתן יהיה לחבר מספיק תאים לספוגית הפה לצורך מיצוי DNA גנומי;עבור מיצוי דגימת כתמי דם, ניתן להגדיל את אזור חיתוך כתמי הדם בצורה מתאימה.
3. Foregene Protease נשמר בצורה לא נכונה, וכתוצאה מכך ירידה בפעילותו או חוסר הפעלה שלו.
המלצה: אשר את תנאי האחסון של Foregene Protease או החלף אותו עם Foregene Protease חדש לתגובה אנזימטית.
4. שימור לא נכון של הערכה או זמן האחסון ארוך מדי, וכתוצאה מכך כשל של חלק מהרכיבים בערכה.
המלצה: רכוש ערכת בידוד DNA חדשה עם ספוגית מסוג Buccal עבור הליכים קשורים.
5. Buffer WB אינו מוסיף אתנול מוחלט.
המלצה: אשר שחוצץ WB מוסיף את הנפח הנכון של אתנול מוחלט.
6. המסיר לא הוסיפו כראוי לסרט הסיליקון.
המלצה: הוסף 65 מעלות צלזיוס טיפות מחממות מראש לאמצע קרום הסיליקון והשאיר בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להגביר את יעילות הפליטה.
DNA גנומי בעל תפוקה נמוכה מבודד
הגורמים האפשריים הבאים הם כדלקמן:
1. שימור לא נכון של דגימות או אחסון לאורך זמן מוביל לפירוק DNA גנומי.
המלצה: רצוי לדגום ספוגיות אוראלי טריות, ואין להשתמש בספוגיות משומרות למיצוי DNA גנומי.
2. אם כמות דגימת הרקמה קטנה מדי, תכולת ה-DNA הגנומית המופקת תהיה קטנה יותר.
המלצה: עקוב אחר הוראות דגימת ספוגית הפה במדריך ההפעלה, ניגוב כמה שיותר פעמים כדי שניתן יהיה לחבר מספיק תאים לספוגית הפה לצורך מיצוי DNA גנומי.
3. Foregene Protease נשמר בצורה לא נכונה, וכתוצאה מכך ירידה בפעילותו או חוסר הפעלה שלו.
המלצה: אשר את תנאי האחסון של Foregene Protease או החלף אותו עם Foregene Protease חדש לתגובה אנזימטית.
4. בעיות סלק.
המלצה: השתמש במאגר EB לאלוציה;אם משתמשים ב-ddH2O או eluents אחרים, אשר כי ה-pH של eluate הוא בין 7.0-8.5.
5. ה-eluate לא הוסף בצורה נכונה טיפה.
המלצה: הוסף טיפות eluent לאמצע קרום הסיליקון והשאיר בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להגביר את יעילות הפליטה.
6. נוזל הפליטה מצטבר מעט מדי.
המלצה: השתמש בחומר eluent עבור eluent DNA גנומי כנדרש בהוראות, לפחות לא פחות מ-15 μl.
טוהר נמוך של DNA גנומי מבודד
טוהר DNA גנומי נמוך יכול להוביל לכישלון או לתוצאות לא מספקות של ניסויים במורד הזרם, כגון: לא ניתן לחתוך אנזימים, PCR לא יכול לקבל את קטע הגן המעניין וכו'.
הגורמים האפשריים הם כדלקמן:
1. זיהום הטרופרוטאינים, זיהום RNA.
ניתוח: עמודת הטיהור לא נשטפה באמצעות Buffer PW;עמודת טיהור שטיפת Buffer PW לא נשטפה במהירות הצנטריפוגלית הנכונה.
המלצה: ודא שאין משקעים בסופרנטנט לפני הוספת אתנול;הקפד לשטוף את עמודת הטיהור לפי ההוראות, ולא ניתן לוותר על שלב זה.
2. זיהום יונים טומאה.
ניתוח: עמודת טיהור שטיפת חוצץ WB הושמטה או נשטפה רק פעם אחת, וכתוצאה מכך זיהום יוני שיורי.
המלצה: הקפד לשטוף את Buffer WB 2 פעמים לפי ההוראות כדי להסיר שאריות יונים ככל האפשר.
3. זיהום אנזים RNA.
ניתוח: RNases זרים נוספו למאגר;פעולת השטיפה של Buffer PW הייתה שגויה, וכתוצאה מכך שאריות RNase השפיעו על פעולות ניסוי של RNA במורד הזרם, כגון שעתוק חוץ גופית.
המלצה: ערכות לבידוד חומצות גרעין מסדרת Foregene יכולות להסיר RNA ללא תוספת נוספת של RNase, ולכן ערכת בידוד DNA של כרטיס FTA לא חייבת להוסיף RNase;הקפד לעקוב אחר ההוראות עבור עמודת טיהור כביסה Buffer PW, ולא ניתן לוותר על שלב זה.
4. שאריות אתנול.
ניתוח: Buffer WB לא ביצע צנטריפוגה של צינור ריק לאחר שטיפת עמודת הטיהור.
המלצה: בצע את פעולת הצנטריפוגה הנכונה של צינור ריק בהתאם להוראות.
5. זיהום טומאה אחר.
ניתוח: דגימות שמורות או דגימות מיוחדות אינן מטופלות מראש.
המלצה: טפל היטב את הדגימה לפי ההוראות.
