היחס הנמוך של A260/A230 נגרם בדרך כלל על ידי זיהומים עם אורך גל קליטה מרבי ב-230 ננומטר.בוא נראה מה כוללים זיהומים אלה:

• מזהמים נפוצים	אורך גל ספיגה	אפקט יחס
  חֶלְבּוֹן	~230nm ו-280nm	הפחתה בו-זמנית של A260/A 280ו-A260/A 280יחסים
  מלח גואנידין	220-240 ננומטר	הקטינו את ה-A260/A 280יַחַס
  פנול	~270 ננומטר	-
  טריזול	~230nm ו-270nm	הקטינו את ה-A260/A 280יַחַס
  EDTA	~230 ננומטר	הקטינו את ה-A260/A 280יַחַס
  אתנול	230-240 ננומטר	הקטינו את ה-A260/A 280יַחַס

 
 
 
אורך גל וערך ניגודיות של מזהמים נפוצים

Pזיהום רוטין
זיהום חלבון יכול להיחשב כזיהום הנפוץ ביותר בתהליך מיצוי חומצת הגרעין.חלבון קיים בין השלב המימי העליון לתחתוןאורגנישלב .זיהום יפחית את היחס של A260/A280 ו-A260/A230 בו זמנית, והיחס של A260/A230 ישתנה בצורה ברורה יותר מהיחס של A260/A280.
במהלך שלאחר מכןתעתיק הפוךor תגובות qPCR, שאריות חלבון יכולות לעכב או להפריע לתפקוד האנזים.הדרך הטובה ביותר להימנע מזיהום חלבון היא לזכור את העיקרון של "ולא פחות מאשר יותר, כמות קטנה פעמים רבות" בעת שאיבת הסופרנטנט.

2. זיהום גואנידיום
להידרוכלוריד (GuHCl) ולגואנידין טיוציאנאט (GTC) יש השפעה של דנטורציה של חלבונים, שיכולים להרוס במהירות את ממברנות התא במהלך תהליך מיצוי חומצת הגרעין, ולגרום לדנטורציה של חלבון ולמשקעים.אורך גל הקליטה של ​​GuHCl ו- GTC הוא בין 220-240 ננומטר, והשאריות מלח גואנידיום יקטין את היחס של A260/A230.למרות ששאריות המלח גואנידיום יקטין את היחס,ההשפעה על ניסויים במורד הזרם היא למעשה זניחה.

3. זיהום טריזול
המרכיב העיקרי של טריזול הוא פנול.תפקידו העיקרי של הפנול הוא ליזור תאים ולשחרר חלבונים וחומרי חומצת גרעין בתאים.למרות שפנול יכול לסנן חלבונים ביעילות, הוא לא יכול לעכב לחלוטין את פעילות RNase.לכן, 8-hydroxyquinoline, guanidine isothiocyanate, β- mercaptoethanol וכו' מתווספים ל-TRIzol כדי לעכב RNase אנדוגני ואקסוגני.
בעת מיצוי RNA תאי, Trizol יכול לרזות במהירות את התאים ולעכב את הנוקלאז המשתחרר מהתאים, וה-Trizol שיורי יפחית משמעותית את היחס של A260/A230.
שיטת עיבוד: בצנטריפוגה יש לשים לב שהפנול בטריזול מסיס בקלות בשלב המים בתנאי 4° וטמפרטורת החדר.

4. שאריות אתנול
אתנול משמש בתהליך הסופי כדי לזרז את ה-DNA תוך המסת יוני מלח שעלולים להיות קשורים ל-DNA.אורך גל הקליטה של ​​הגבוה ביותרשיא ספיגה שלאתנול הוא גם ב 230-240 ננומטר, אשריקטין גם את היחס של A260/A230.
ניתן לחזור על השיטה של ​​הימנעות משאריות אתנול פעמיים במהלך הפליטה הסופית, לנשוף פנימהקולט אדיםבמשך שתי דקות כדי לאפשר לאתנול להתאדות במלואה לפני הוספת חיץ לאלוציה.
עם זאת, יש לדעת שהיחס הוא רק מדד הערכה של איכות ה-RNA.אם הפעולות האמורות לעיל יוסדרו בקפדנות, לסטייה בין היחס לטווח הסטנדרטי לא תהיה השפעה רבה על ניסויים במורד הזרם.
מוצרים קשורים:
ערכת בידוד RNA Total RNA של בעלי חיים
ערכת בידוד כולל RNA של צמחים
ערכת בידוד RNA Total Cell
Kit Total RNA Isolation Plant Plus