שאלות נפוצות עבורערכת בידוד RNA Total RNA של בעלי חיים
הניתוח הבא של הבעיות שבהן אתה עלול להיתקלמיצוי רקמה/תא RNA של בעלי חיים will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
RNA אינו מופק או התשואות של RNA נמוכות
לעיתים קרובות ישנם מגוון גורמים המשפיעים על יעילות ההחלמה, כגון: תכולת RNA של דגימת רקמה, שיטת הפעולה, נפח הפליטה וכו'.
1. אמבט קרח או צנטריפוגה קריוגנית (4 מעלות צלזיוס) בוצעה במהלך הפעולה.
המלצה: פעל בטמפרטורת החדר (15-25 מעלות צלזיוס) לאורך כל התהליך, אל תעשה אמבט קרח וצנטריפוגה בטמפרטורות נמוכות.
2. שימור דגימה לא תקין או זמן אחסון מופרז של דגימות.
המלצה: אחסן דגימות ב-80 מעלות צלזיוס או הקפאה בחנקן נוזלי והימנע משימוש חוזר בהקפאה-הפשרה;נסו להשתמש ברקמות טריות או בתאים מתורבתים לצורך מיצוי RNA.
3. תמוגה לא מספקת של דגימה.
המלצה: בעת הומוגניזציה של רקמות, ודא שהרקמה הומוגנית מספיק ושתאי הרקמה מפוצלים מספיק כדי להסביר את שחרור ה-RNA.
4. המסיר לא הוסף כהלכה.
המלצה: אשר כי RNase-Free ddH2O מתווסף טיפה לאמצע קרום עמודת הטיהור.
5. הנפח הנכון של אתנול מוחלט לא התווסף למאגר RL2 או למאגר RW2.
המלצה: עקוב אחר ההוראות, הוסף את הנפח הנכון של אתנול מוחלט למאגר RL2 ול-Buffer RW2 וערבב היטב לפני השימוש בערכה.
6. מינון דגימת רקמות אינו מתאים.
המלצה: השתמש ב-10-20 מ"ג של רקמה או (1-5) × 106תאים לכל 500 μl חיץ RL1, כמו שימוש מוגזם ברקמה יכול לגרום לחילוץ RNA מופחת.
7. נפח חלוקה לא תקין או שחרור לא שלם.
המלצה: נפח האלוציה של עמודת הטיהור הוא 50-200 μl;אם אפקט החלוקה אינו משביע רצון, מומלץ להאריך את זמן המיקום בטמפרטורת החדר לאחר הוספת RNase-Free ddH מחומם מראש2הו, למשל למשך 5-10 דקות.
8. בעמודת הטיהור יש שאריות אתנול לאחר שטיפת Buffer RW2.
המלצה: אם יש שאריות אתנול לאחר שטיפת Buffer RW2, צנטריפוגה של צינור ריק למשך 1 דקה, ניתן להגדיל את זמן פעולת הצנטריפוגה של צינור ריק ל-2 דקות, או שניתן למקם את עמודת הטיהור בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להסיר כראוי את שאריות האתנול.
RNA מטוהר מתכלה
איכות ה-RNA המטוהרת קשורה לגורמים כמו שימור הדגימה, זיהום RNase ומניפולציה וכו'.
1. דגימות רקמות אינן נשמרות בזמן.
המלצה: אם לא נעשה שימוש בדגימות רקמה או תאים בזמן לאחר האיסוף, שמור מיד ב-80 מעלות צלזיוס או בחנקן נוזלי.כדי לחלץ RNA, השתמש בדגימת רקמה או תא שנלקחה לאחרונה במידת האפשר.
2. הקפאה-הפשרה חוזרת של דגימות רקמה.
המלצה: כשמאחסנים דגימות רקמה, עדיף לחתוך אותן לחתיכות קטנות לשימור, ולהסיר אחת מהחתיכות בעת השימוש בהן כדי למנוע הקפאה-הפשרה חוזרת של הדגימה ופירוק ה-RNA.
3. RNase מוכנס או לא לובש כפפות חד פעמיות, מסכות וכו' במהלך הניתוח.
המלצה: ניסויי מיצוי RNA מבוצעים בצורה הטובה ביותר בחדרי מניפולציה נפרדים של RNA והטבלה מנוקה לפני הניסוי.
ללבוש כפפות ומסכות חד פעמיות במהלך הניסוי כדי למזער את פירוק ה-RNA שנגרם כתוצאה מהחדרת RNase.
4. ריאגנטים מזוהמים עם RNase במהלך השימוש.
המלצה: החלף בערכת בידוד כוללת RNA חדשה של בעלי חיים לניסויים קשורים.
5. צינורות הצנטריפוגות, העצות וכו' המשמשים במניפולציה של RNA מזוהמים ב-RNase.
המלצה: אשר שצינורות הצנטריפוגות, העצות, הפיפטות וכו' המשמשים למיצוי RNA כולם ללא RNase.
RNA מטוהר שהושג משפיע על ניסויים במורד הזרם
RNA מטוהר על ידי עמודת הטיהור, אם יוני המלח, תכולת החלבון גדולה מדי תשפיע על הניסוי במורד הזרם, כגון: שעתוק הפוך, Northern Blot et al.
1. ל-RNA הנשלף יש שאריות של יוני מלח.
המלצה: אשר שהנפח הנכון של אתנול נוסף למאגר RW2 ובצע 2 שטיפות עמודות טיהור במהירות הצנטריפוגלית המצוינת לפעולה;אם יש שאריות של יוני מלח, השאר את עמודת הטיהור למאגר RW2 למשך 5 דקות בטמפרטורת החדר ובצע צנטריפוגה כדי למקסם את הסרת זיהום המלח.
2. שאריות אתנול ב-RNA שנפלט.
המלצה: אשר שלאחר שטיפת חיץ RW2, בצע את פעולת הצנטריפוגה של הצינור הריק במהירות הצנטריפוגה המצוינת לפעולה, הגדל את זמן פעולת הצנטריפוגה של הצינור הריק ל-2 דקות אם עדיין יש שאריות אתנול, או השאר אותו בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות לאחר הצנטריפוגה של הצינור הריק כדי למקסם את הסרת שאריות אתנול.
בידוד של סוגי דגימות חומצה נולציאית
ערכות בידוד RNA של Foregene יכולות להשיג בידוד/מיצוי RNA מלא מהמקורות הבאים לדוגמא: רקמת בעלי חיים, צמח, תאים, ויראלי, דם וכו'.
איך אני מאחסן את הערכה
אחסון בטמפרטורת החדר למשך 24 חודשים.
זמן פרסום: מרץ-01-2022
