שיטות PCR וזיהום תרסיס חומצת גרעין במעבדות לבדיקת חומצות גרעין הן כמו שני צדדים של מטבע.אנחנו יכולים לבחור רק לקבל את זה או לא, אבל אנחנו לא יכולים לבחור אם אנחנו רוצים את זה או לבזבז אותו.

1. הקרנה של מסיר DNA

כדי להשיג הסרה מרחבית של זיהום אירוסול חומצת גרעין, יש צורך תחילה לסנן מסירי DNA שיכולים להסיר חומצות גרעין במצב נוזלי.כי אין הרבה מסירי DNA שבאמת עובדים.לשיטת הניסוי נא לעיין: מסיר DNA לא יכול להיות "פינה סודית" של המעבדה!

בניסוי זה, 100 עותקים/μL (CT כ-31) של פלסמיד ASFV ומסיר DNA שכומתו על ידי PCR דיגיטלי, ערבבו בנפחים שווים, ולאחר מכן הגיבו בטמפרטורת החדר למשך 10 דקות, 20 דקות ו-30 דקות בהתאמה.לאחר מיצוי חומצת גרעין, בוצע הגברה של qPCR.הושווה ביקורת חיובית מעורבת עם פלסמיד ומים.מכיוון שהניסוי לא הושלם במקביל, תיתכן סטייה מסוימת בין התוצאות, אך היא אינה משפיעה על סיום הניסוי.עד כה, הערכתי 10 מוצרים מסחריים להסרת DNA.רק מוצרים מס' 1, מס' 6 ומספר 8 יכולים לפרק ביעילות DNA פלסמיד במצב נוזלי.למוצרים אחרים אין כמעט השפעה.

טבלה 1 השפעת הסרת חומצת גרעין של מסיר DNA זמין מסחרית

2. ניסוי אפקט הסרת ה-DNA של חומרי חיטוי נפוצים

1. סינון של חומרי חיטוי נפוצים

ישנם סוגים רבים של חומרי חיטוי הנפוצים במעבדות: אלדהידים, פנולים, אלכוהולים, מלחי אמוניום רבעוניים, פרוקסידים, תכשירי כלור וחומצות ובסיסים.השפעות החיטוי של חומרי חיטוי אלה על מיקרואורגניזמים אומתו במלואה על ידי ניסויים, אך אין מספיק נתונים ניסיוניים על השפעת הפירוק של חומצות גרעין.מעבדות לבדיקת חומצות גרעין זקוקות לחומר חיטוי שלא רק בעל השפעת חיטוי טובה על מיקרואורגניזמים, אלא גם יכול לשבור את ה-DNA.תוצאות הבדיקה מראות שרק שני תכשירי כלור של 84 חומר חיטוי וחומצה טריכלורואיזוציאנורית וחומצה הידרוכלורית 1 M עומדים בדרישות.מכיוון שחומצת מלח 1 M היא מאכלת מאוד, מומלץ להשתמש בתכשירי כלור כסילוק פסולת במעבדות לבדיקת חומצות גרעין.עם זאת, תכשירי כלור מאכלים מתכות ואינם יכולים לשמש לחיטוי מכשירים וציוד.

טבלה 2 השפעות הסרת DNA של סוגים שונים של חומרי חיטוי

2. הריכוז המינימלי היעיל של תכשירי כלור

לחומרי חיטוי המבוססים על כלור יש אפקט פירוק DNA חזק, אך בשל מידת הקורוזיביות והגירוי של המתכת שלהם, ניתן להשתמש בהם לניקוי הרצפה, משטחים שאינם מתכתיים, קצות השרייה, שפופרות צנטריפוגות ופריטי בדיקה אחרים.

על פי "הנחיות טכניות לחיטוי מגפת דלקת ריאות כלילית חדשה": מזהמים (דם, הפרשות והקאות של מטופלים) כלור זמין 5g/L-10g/L חומר חיטוי המכיל כלור;רצפות, קירות ומשטחי חפצים משתמשים בחומר חיטוי כלור זמין 1g/L כלור: בגדים, מצעים וטקסטיל אחר מושרים תחילה בחומר חיטוי כלור עם 0.5g/L כלור זמין למשך 30 דקות, ולאחר מכן מנוקים כרגיל.

טבלה 3 השפעת הסרת DNA של ריכוזים שונים של חומר חיטוי כלור

תוצאות הבדיקה מראות כי: כאשר ריכוז הכלור היעיל גדול או שווה ל-1.2 גרם/ליטר, חומר החיטוי המכיל כלור יכול לבזות לחלוטין 100 עותקים/μL פלסמיד בשימוש במשך 5 דקות.כאשר פועלים במשך 10 דקות, חומר חיטוי 84 עם ריכוז כלור יעיל הגדול מ-0.6 גרם/ליטר או שווה ל-0.6 גרם/ליטר יכול לבזות לחלוטין 100 עותקים/מיקרוליטר של פלסמידים.

3. ניסוי הוצאת אוויר מזוהם בתרסיס חומצת גרעין

כיצד לנקות את האוויר המזוהם על ידי אירוסולים של חומצות גרעין?רוב המחשבות הן ליצור סביבה מזוהמת אירוסול ואז לנקות אותה, או לנקות חומצות גרעין לאחר זיהום.מבחינתי ניסוי שאי אפשר לחזור עליו ולא ניתן לנתח כמותית את תוצאות הניסוי הוא חסר משמעות, אז שאלתי כמה שיטות של חיטוי אוויר מחטא.ראה "דרישות כלליות של GB27948-2020 לחומרי חיטוי אוויר" ו"מפרט טכני לחיטוי"

1. חומרי בדיקה

1.1 מסיר DNA: בניסוי זה, נבחרו שני מסירי DNA זמינים מסחרית 6 ו-8 בטבלה 1.

1.2 פלסמיד בדיקה: בהתחשב בכך שערך ה-CT של רוב זיהום המעבדה יהיה גבוה מ-30, ריכוז הפלסמיד של הגן ASFV בשימוש הפעם הוא כ-100 עותקים/μL, וה-PCR ה-CT הכמותי הפלורסנטי הוא כ-31.07.הוסף את הפלסמיד לספוגית הצמר גפן הנוהרת ויבש באוויר.

1.3 מכשיר בדיקה: מכשיר החיטוי Bilingkehan KVBOX, הנתמך באדיבות על ידי Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., בעל ביצועי חיטוי אוויר מצוינים עם חומר חיטוי מי חמצן, והוא יכול להרוג ביעילות נבגים ומיקרואורגניזמים אחרים.

1.4 שטח בדיקה: חלון העברות סגור של כ-0.1 מ"ק.

2. שיטת בדיקה

כמות חומר החיטוי המוגדרת במכונת החיטוי היא 10 מ"ל, והריכוז הוא 100 מ"ל/מ"ק, שהוא הרבה יותר גבוה מ"GB27948-2020 דרישות כלליות לחומרי חיטוי אוויר": בעת שימוש בחיטוי תרסיס אירוסול, כמות חומר החיטוי צריכה להיות ≤10 מ"ל/מ"ק.