בדיקות מעבדה מתחילות באיסוף דגימות, ואיסוף דגימות הוא הכי קל להתעלם.הדבר החשוב ביותר לאיסוף דגימות הוא לבחור את סוג הדגימה הנכון, להשתמש בכלי דגימה מתאימים ולבצע הובלה ועיבוד סבירים.

I. סוג מדגם

סוגי הדוגמאות הנפוצים הם כדלקמן:

שיטת הדגימה יכולה להתייחס למפרט הטכני לניטור סביבתי של נגיף הקורונה החדש בשוק הסחר החקלאי (בזאר)":

1. לשטוף דגימות ממשטחי גרון, ידיים, בגדים וחפצים אחרים של מתרגלים: נדרש להשתמש בתמיסת שימור הנגיף בצינורית דגימת הנגיף ולהסתנן במלואו למקלוני צמר גפן הדגימה.פני הקרקע) מיושמים שוב ושוב ושוטפים יותר מ-3 פעמים.במקביל, יש צורך לבצע דגימה מבוזרת מרובת נקודות על פני האובייקט הנדגם.

2. דגימות משטחי מזון: לא ניתן לאסוף דגימות מזון ישירות.יש להפריד את המזון שייאסף בזהירות ולאחסן בשקית דגימה נקייה לפני איסוף דגימות ספוגיות.יש להשתמש בתמיסת שימור הנגיף בצינור דגימת הנגיף, לאחר השרייה מלאה של צמר גפן הדגימה, כדי למרוח שוב ושוב ולשטוף את פני השטח של דגימת המזון שיש לאסוף יותר מ-3 פעמים.במקביל, יש צורך לבצע דגימה מבוזרת מרובת נקודות על פני הדגימה.

3. דגימות ביוב: לפי התפלגות מערכת הניקוז בשוק יש לבחור 2-3 מקומות דגימת ביוב תוך התמקדות באיסוף רשת הצנרת הפנימית, במורד כיוון זרימת המים או בחיבור לרשת הצנרת העירונית.כדי לאסוף דגימת ספוגית, יש לטבול אותה בביוב עם צמר גפן לדגימה כדי לגרום לה לספוח את הביוב ולשטוף אותה בצינור הדגימה יותר מ-3 פעמים.כדי לאסוף דגימות ביוב, השתמש בבקבוקי פלסטיק מפוליאתילן לאיסוף דגימות מי ביוב בגודל 30-500 מ"ל;לאיסוף שפכים בנפח גדול מ-500 מ"ל, ניתן להשתמש בדליי פלסטיק מפוליאתילן או בציוד העשרה מיוחד באתר.יחד עם זאת, יש צורך לבצע דיגום מבוזר רב נקודות עבור מקום דיגום הביוב.

4. דגימות של בעלי חיים: עבור בעלי חיים חיים, ניתן להשתמש בספוגיות דגימה לאיסוף ספוגיות משטח הגוף, ספוגיות פה-לוע וספוגיות פי הטבעת, וכן ניתן לאסוף דגימות צואה או הפרשה ולרשום בהתאם לגיליון הרישום.עבור דגימות של בעלי חיים שעברו הסרת עור וכדומה, השתמשו במטליות צמר גפן כדי לאסוף דגימות משטח הגוף וחלל הגוף שלהם.יש צורך להשתמש בתמיסת שימור הנגיף בצינור דגימת הנגיף כדי לחדור במלואו לצמר גפן הדגימה, ולאחר מכן לחזור על היישום של פני השטח של דגימת המזון שיש לאסוף.שאבו יותר מ-3 פעמים.במקביל, יש צורך לבצע דגימה מבוזרת מרובת נקודות על פני הדגימה.

5. מכשירים אחרים: מיכלים להובלה וגידול בעלי חיים כגון כלובים או מיכלי דגים.ראשית, התבונן או הבין את הסוגים הספציפיים של בעלי חיים המאוחסנים וגדלים במיכל, ואסוף דגימות ספוגיות על הדופן הפנימית של המיכל או דגימות נוזליות של התוכן.

6. איסוף דגימות אירוסול באזורים שבהם אנשים מתאספים, אזורי מסחר מקומיים מאווררים בצורה גרועה, משרדים וחדרי מנוחה.

II.כלי דגימה
1. צינור לאיסוף דם
אם אתה צריך לעשות בדיקת חומצות גרעין ודגימות נוגדות קרישה מאוחר יותר, מומלץ להשתמש בכלי דם ואקום המכיל נוגד קרישה EDTA לאיסוף דם;עבור דגימות סרום, מומלץ להשתמש בכלי דם ואקום ללא נוגדי קרישה.

2. ספוגית דגימה

מומלץ להשתמש בספוגיות פוליפרופילן במקום ספוגיות סידן אלגינט או ספוגיות עם מוטות עץ, מכיוון שהן עשויות להכיל חומרים המנטרלים וירוסים מסוימים ומעכבים בדיקת PCR.לא ניתן להשתמש בספוגיות עם ראשי כותנה, מכיוון שלסיבי כותנה יש ספיחה חזקה של חלבון ואינם נפלטים בקלות לתמיסת השימור שלאחר מכן.

ב"מפרט טכני לאיסוף וגילוי 10 ב-1 מעורב של חומצות גרעין חדשות של וירוס קורונה", נקבע בבירור כי "ספוגית הדגימה צריכה להיות עשויה מפוליאסטר, ניילון וחומרים אחרים שאינם כותנה ולא סידן אלגינט, והידית צריכה להיות עשויה מחומר שאינו עץ.נקודת השבירה נמצאת כ-3 ס"מ מהחלק העליון של ראש הספוגית, שקל לשבור אותו".

ה-CDC בארצות הברית הזכיר גם "השתמש רק בספוגיות סיבים סינתטיים עם פירי פלסטיק או תיל.אין להשתמש בספוגיות סידן אלגינט או בספוגיות עם פירי עץ,מכיוון שהם עלולים להכיל חומרים המשביתים וירוסים מסוימים ומעכבים בדיקות PCR.

כיום נעשה שימוש נרחב בספוגית חד פעמית סטרילית מניילון בשילוב עם מוט פלסטיק.לספוגית הנוהרת יש ספיגת מים וקצב שחרור טובים יותר.על פי אתרי דגימה שונים, לראש הספוגית יש גם גדלים וסיבים שונים.העובי.”

3. פתרון שימור תחבורה לדוגמה

תמיסת שימור נטרול וירוסים: כמות מתאימה של ריכוז מלח גואנידין ומגוון מרכיבי תמוגה של וירוסים יכולים ללטש ישירות את הנגיף לשחרור חומצת גרעין, להשבית RNase ו-DNase ולהבטיח את שלמות חומצת הגרעין, שניתן להשתמש בה לגילוי qPCR שלאחר מכן.לא ניתן להשתמש בו לגידול ובידוד וירוסים.

תמיסה להובלה ושימור וירוסים: מכילה מלחים, חומצות אמינו, ויטמינים, גלוקוז וחלבון הדרושים להישרדות הנגיף, שיכולים לשמור על פעילות הנגיף.זה יכול לשמש עבור מיצוי חומצת גרעין וזיהוי של הנגיף בעתיד, והוא יכול לשמש גם לטיפוח והפרדה של הנגיף.

4. צינור שימור לדוגמא ושקית דגימה

צינור אחסון הדגימות צריך להיות צינור פלסטיק סטרילי עם מכסה הברגה שאינו סופח חומצת גרעין.כל צינור דגימה צריך להיות מכוסה בשקית דגימה כדי למנוע דליפה וזיהום של הדגימה.

III.חומרים מפריעים בדגימה

חומרים מפריעים בניסויי PCR

1. התערבות אנדוגנית

חומרים הנמצאים בדגימת הגוף יכולים להפריע לזיהוי חומרים אחרים.

דָם:heme (>1mg/ml), המין (>0.1ng/μl), טריגליצרידים, IgG וכו';

שֶׁתֶן:אוריאה (20 מ"מ);

שְׁרַפרַף:פוליסכרידים צמחיים, כולאט;

רִקמָה:פרוטאז, קולגן;

חלב: פרוטאז, יון סידן;

סמים: אנטיביוטיקה, תרופות אנטי-ויראליות, הורמונים וכו'.

אַחֵר.

2. התערבות אקסוגנית

זה מגיע מחומרים שיכולים להפריע לזיהוי חומרים אחרים במבחנה.תוספים וחומרים לדוגמא שניתן ליצור איתם קשר במהלך איסוף ועיבוד הדגימות:

ציוד לבדיקה: ג'ל להפרדה בסרום, מיכל איסוף דגימות ופקק גומי, קטטר, נוזל שטיפה בקטטר, אבקת כפפות וכו'.

נוגד קרישה: הפרין (>0.1 U/mL), EDTA (>0.5 mM) וכו';

ממיסים אורגניים: isopropanol (>0.1 IU/ml), בטאין, דימתיל סולפוקסיד, פורמאמיד, גליצרין, PEG וכו';

חומרי חיטוי: אלכוהולים (אתנול>1%), אלדהידים, פנולים (פנול>0.2%), פרוקסידים, חומצות חזקות (HCL), אלקליות חזקות (NaOH) וכו';

חומר ניקוי:SDS (>0.005%);

אדמה: חומוס

חומר צבע: אינדיגו

אַחֵר.

בתנאי דיגום חיצוניים בפועל, כמו איסוף דגימות סביבתיות, הדגימות עשויות להכיל מגוון חומרים מפריעים, והרכב החומרים המפריעים בכל מקום שונה, מה שמחייב ביצוע ניסויי הפרעות PCR בהתאם לתנאים המקומיים.

IV.תנאי אחסון והובלה לדוגמה

יש לשלוח דגימות קליניות טריות שנאספו למעבדה תוך 2 עד 4 שעות לאחר האיסוף ב-2°C עד 8°C.אחסן בטמפרטורה של 4℃ תוך 24 שעות.יש לבדוק דגימות המשמשות לבידוד וירוסים ולזיהוי חומצות גרעין בהקדם האפשרי.ניתן לאחסן דגימות שניתן לבדוק תוך 24 שעות ב-4°C;יש לאחסן דגימות שלא ניתן לזהות תוך 24 שעות ב-70 מעלות צלזיוס ומטה (אם לא- יש לאחסן ב-70 מעלות צלזיוס במקרר ב-20 מעלות צלזיוס).

סיכום:האיסוף הסטנדרטי, ההובלה והאחסון של דגימות חיוניים לבדיקות הבאות.השלילי הכוזב של בדיקות מעבדה רבות נגרמות מאיסוף, הובלה ואחסון לא נאותים של דגימות שמובילים לפירוק חומצת גרעין ויראלית.עם זאת, מעבדות רבות עדיין מתעלמות מחשיבות הדגימה.אני מקווה שמאמר זה יכול לעורר את תשומת הלב של כולם לדגימה ולעשות דגימה מדעית והגיונית יותר!

מוצרים קשורים:

ערכת זיהוי חומצות גרעין מסוג SARS-CoV-2 (I) (שיטת Multiplex PCR Fluorescent Probe) - לזיהוי מוטנטים מברזיל, דרום אפריקה ובריטניה