כמה אתה יודע

על נמיצוי חומצת יוקלאית

ההתחלה והסוף של חומצת גרעין מטוהרת

הכל קשה בהתחלה, חומצת גרעין מטוהרת היא הכי הרבה

התחלת ניסויים מולקולריים, לניסויים הבאים

להצלחה או לכישלון יש השפעה מכרעת.

ספקטרופוטומטר UV עקבות/אולטרה-עקבות מועדף על ידי חוקרים מדעיים רבים מכיוון שהוא יכול לזהות ריכוז חומצות גרעין ושאריות יונים של חלבון ומלח בצורה פשוטה, מהירה וחסכונית.

כפי שכולנו יודעים, A260 פירושו ערך OD של ספיגת חומצת גרעין, A280 פירושו ערך OD ספיגת ריכוז חלבון, A230 פירושו ערך OD ספיגת ריכוז יוני מלח, כך ש-A260 יכול להמיר ריכוז חומצת גרעין, A260/280 פירושו שאריות חלבון, A260/230 פירושו שאריות יון מלח, אבל זה רק מדד גדול של מחקרים שהתגלו על בסיס כלל ותוצאות גדולות.מוּסכָּם"להאמין שזה יכול להסביר את טוהר ה-DNA וה-RNAבמידה מסוימת.זה לא התקן היחיד לזיהוי התפוקה והטוהר של חומצת גרעין, הוא משמש רק כאסמכתא, וזה לא "תקן זהב".

המדריך של Thermo Fisher ND-2000 מדגיש את מהימנות תוצאות הבדיקה

הסיבה היא שהתוצאות המתקבלות באמצעות ספקטרופוטומטר מיקרו/אולטרא-מיקרו משקפות רק את התפוקה והטוהר של חומצת הגרעין מהצד, ויש הרבה גורמים משפיעים (נתיב אופטי, נפח דגימה, ריכוז דגימה, ערך pH, יונים אחרים המשפיעים על מדידת ספיגה וכו'), ערך ה-OD הנמדד אינו בהכרח מדויק.יחד עם זאת, בשל היעדר הספציפיות של החומר לקביעת ערך הספיגה, ל-DNA חד-גדילי, DNA דו-גדילי, RNA, dNTPs וחלק מהחלבונים יש לכולם שיאי ספיגה באורך גל של 260nm, והריכוז שנקבע על ידי A260 לבדו אינו בהכרח ה-DNA או ה-RNA האמיתיים.אי אפשר לשפוט את הריכוז, ואת שלמותו והשפלה.

אז איך לשפוט את האיכות של חומצת הגרעין המטוהרת שלנו?בנוסף לשימוש בספקטרופוטומטר UV מיקרו/אולטרא-מיקרו לגילוי, נדרשות גם שיטות כמו אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז כדי להציג חזותית את טוהר ושלמות חומצת הגרעין, ולציין את הריכוז במידה מסוימת.באופן זה, תפוקת חומצת הגרעין והטוהר המתקבלים מתוצאות הגילוי של שיטות שונות אמינים.

השוואה נסיונית של תרשים

DNA גנומי של תאי H1299 הופץ באמצעות ערכות ה-DNA Extraction של חברה A, ונראה זיהום משמעותי בטומאה, שהביא לערכי OD גבוהים

(ערך מדידת OD והאלקטרופרוגרמה המתאימה)

מדד הערכה

האם יש "תקן זהב" לתפוקת חומצות גרעין ובדיקות איכות?

ככל הידוע לנו, אין שיטה פשוטה, מהירה וזולה.בין אם זה ספקטרופוטומטר, אלקטרופורזה של ג'ל או ספקטרומטריית מסה, כולם משקפים את הריכוז והטוהר של חומצת הגרעין בתמיסה מהיבטים שונים, ויש לשפוט אותם על ידי התייחסות זה לזה.

מדד ההערכה הטוב ביותר הוא תמידהיישום הניסיוני ההמשך.זה לא משפיע על היעילות של שעתוק הפוך והגברת PCR.השגת תוצרי הגברה אמינים וערכי Ct, וקבלת רצף שלם על ידי רצף היא מיצוי חומצת גרעין מוצלחת.

לסיכום, יש לקרוא תיגר על ההשקפה של תיאוריית היחס בלבד על ידי התפיסה של "שימוש בתוצאות ניסוי טובות במורד הזרם כפרמטרי מיצוי טובים"!

ערכות מיצוי RNA של Foregene DNA מומלצות להשגת טוהר DNA/RNA גבוה:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/