עוֹפֶרֶת

RNA ארוך שאינו מקודד, lncRNA הוא RNA שאינו מקודד באורך של יותר מ-200 נוקלאוטידים, בדרך כלל בין 200-100000 nt.lncRNA מווסת את ביטוי הגנים ברמות אפיגנטיות, שעתוק ופוסט-תעתוק, ומשתתף בהשתקת כרומוזום X, החתמת גנום ושינוי כרומטין, הפעלת תעתוק, הפרעות שעתוק, הובלה גרעינית, ויסות מחזור תאים, ויסות התמיינות תאים, ותופעות פיצוי חשובות אחרות הקשורות במינון להתרחשות ותהליכים חשובים של ויסות פיצויים ותהליך מניעת התרחשות, ותופעות רבות אחרות הקשורות לוויסות הפיצוי. יון של מחלות אנושיות, והם כיום אחד הנקודות החמות בתחום הביו-רפואה.

01  סוגים ומאפיינים של LncRNA

lncRNA מחולק לסוגים רבים על פי המקורות השונים להיווצרותו, כפי שמוצג באיור למעלה.בעל המאפיינים הבאים:

1. lncRNAs הם בדרך כלל ארוכים יותר, עם ביטוי דינמי ושיטות שחבור שונות במהלך הבידול
2. בהשוואה לגנים מקודדים, ל-lncRNA יש בדרך כלל רמת ביטוי נמוכה יותר
3. לרוב ה-lncRNAs יש סגוליות ביטוי זמני ומרחבי ברור בתהליך של התמיינות והתפתחות רקמות
4. ישנם ביטויים אופייניים בגידולים ומחלות אחרות
5. המיקומים התת-תאיים של lncRNA מגוונים
6. הרצף נמוך בשימור, אך לפונקציה יש מידה מסוימת של שימור וכו'.

02 שאלות נפוצות לגבי תעתיק הפוך של LncRNA

בשל התוכן הנמוך של lncRNA בתאים, אורך ארוך ומבנה ברמה גבוהה, ל-RNA כזה יש לרוב מבנים מורכבים כמו לולאות גזע או סיכות ראש, ו-RT-qPCR נוטה לבעיות של שעתוק לא מוצלח או יעילות נמוכה.

03 פתרון לשעתוק הפוך של LncRNA

בהלכה המרכזית, התהליך של נגיפי RNA המשתמשים ב-Reverse Transcriptase משלהם כדי לסנתז DNA באמצעות RNA כתבנית נקרא שעתוק הפוך.תהליך השימוש בתעתיק הפוך של וירוס RNA לסינתזה של תבנית cDNA במבחנה נקרא שעתוק הפוך.המרכיבים העיקריים הכלולים במערכת השעתוק ההפוך: תבנית RNA, תעתיק הפוך, פריימרים ורכיבים נוספים.

תבנית 1.RNA

ההשפעה של תבנית RNA על שעתוק הפוך באה לידי ביטוי במבנה, בטוהר ובשלמות שלה.ככל שהטוהר והשלמות של ה-RNA המופק גבוהים יותר, כך היעילות של שעתוק הפוך גבוהה יותר והתוצאות הכמותיות הבאות מדויקות יותר.ה-RNA המטוהר על ידי ריאגנטים נפוץ למיצוי RNA מכיל לעתים קרובות שאריות של מלחי אלכוהול וגואנידין, שיש להם השפעה מעכבת חזקה על רוב התעתיק ההפוך.

2.תעתיק הפוך

לשעתוק הפוך יש השפעה מרכזית על כל מערכת התמלול ההיפוך.הטמפרטורה המתאימה לתעתיק ההפוך המשמש ברוב המעבדות היא בדרך כלל 42 מעלות צלזיוס.למעשה, פתיחת מבנה ה-RNA ברמה גבוהה דורשת טמפרטורה גבוהה יותר, והדרישות לתעתיק ההפוך גבוהות יותר.

3.תֶחֶל

פריימרים לשעתוק הפוך כוללים פריימרים ספציפיים לגנים, פריימרים אקראיים ופריימרים של Oligo dT.רוב ה-lncRNAs אינם מכילים זנבות polyA, וחשוב להתאים כראוי את הפריימרים האקראיים עם Oligo dT.

4. רכיבים אחרים

לאור העובדה ש-RNA קל במיוחד לפירוק, ניתן למזער את הכנסת הרכיבים למערכת השעתוק ההפוך, מה שיכול למעשה למנוע את כניסת RNase ולהבטיח התקדמות חלקה של שעתוק הפוך.

Fאורג'יןמשיגה מתבנית RNA, שעתוק הפוך ל-qPCR

ליווי מקיף את זיהוי ה-lncRNA שלך

בעלי חיים כולל RNA Iנחמהערכה (עם עמודה להסרת gDNA)

תא סך RNA Iנחמהערכה (עם עמודה להסרת gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(עם gDNase)(Super Premix לסינתזת cDNA של גדיל ראשון מ-lncRNA)

זמן אמת PCR EasyTM-SYBR ירוק I

Aיתרונות ofמיצוי RNA:

הערכה משתמשת בטכנולוגיית מיצוי RNA מהדור השלישי, אין צורך להשתמש ב-DNase.

11 דקות מתאי תרבות של 96, 24, 12 ו-6 בארות, מיצוי ביעילות גבוהה של RNA כולל תאים ללא gDNA, טוהר גבוה ואיכותי.

היתרונות של תעתיק הפוך של lncRNA:

מערכת שעתוק לאחור שפותחה במיוחד עבור LncRNA להסרה מהירה של זיהום DNA גנומי.

למערכת השעתוק ההפוך יש יציבות תרמית גבוהה ועדיין יש לה ביצועי שעתוק הפוך טובים ב-50 מעלות צלזיוס.

ניתן להפוך תבניות עם תכולת GC גבוהה ומבנה משני מורכב ביעילות גבוהה.

יתרונותof qPCR:

התחלה חמה של Foregene Taq Polymerase יש יעילות הגברה גבוהה יותר, רגישות הגברה גבוהה יותר וסגוליות הגברה גבוהה יותר

ה-Real PCR Easy Mix האופטימלי גורם ל-SYBR Green I להיות בעל רגישות זיהוי גבוהה יותר, ועוצמת הקרינה שלו היא פי 3-5 מזו של מוצרים דומים, שיכולים לענות על הצרכים של סוגים שונים של ניסויים כמותיים פלואורסצנטי.