אנזים Hot-start Taq נמצא בשימוש נרחב.בהשוואה ל-DNA פולימראז רגיל, אנזים Hot-Start Taq יכול למנוע ביעילות הגברה לא ספציפית ויצירת דימרים פריימר, ויכול לשפר ביעילות את שיעור ההצלחה של הגברה של גן מטרה.במיוחד בתחום הבדיקות הגנטיות, אנזים Hot-Start Taq זוהה כתקן חובה בתעשייה, ואין להשתמש ב-DNA פולימראז רגיל.כפי שניתן לראות מהאמור לעיל, נעשה שימוש נרחב באנזימי Taq עם התחלה חמה.נכון להיום, ישנם מותגים רבים של אנזימי Taq Hot-Start בשוק המקומי, אך אין הרבה אנזימים Hot Start Taq באיכות גבוהה.מול כל כך הרבה מוצרי אנזימים Taq מתחילים, כיצד עלינו לבחור?

1. בחר את האנזים Taq להתחלה חמה עם יעילות הגברה גבוהה

יעילות הגברה של PCR קשורה קשר הדוק לביצועים של אנזים Taq.לאחר אופטימיזציה של מערכת תגובת אנזים Taq טובה, יעילות ההגברה היא מעל 95%, וטווח ההגברה של כמות התבנית הראשונית רחב.ניתן להשיג הגברה מספקת כאשר תכולת גן המטרה נמוכה, ולא קל להרעיל כאשר כמות התבנית גבוהה, ותקופת ההגברה האקספוננציאלית ארוכה.עבור האנזים Taq עם ביצועים גרועים, גם אם מערכת התגובה עברה אופטימיזציה במשך פעמים רבות, יעילות ההגברה עדיין נמוכה מ-90%, צורת "S" של עקומת ההגברה אינה ברורה, השיפוע קטן והעקומה שטוחה.כאשר כמות התבנית נמוכה, לא ניתן להגביר אותה, וכאשר כמות התבנית גבוהה, אפקט ההגברה אינו אידיאלי.לכן, הבחירה של פולימראזות DNA עם יעילות הגברה גבוהה היא קריטית להצלחת PCR ו-qPCR.

2. בחר אנזים Taq להתחלה חמה עם כוח אנזים חזק

הכוח האנזימטי של האנזים Taq קשור ליעילות ההגברה.ככלל, ככל שהעוצמה האנזימטית של האנזים Taq עם התחלה חמה יותר חזקה יותר, תקופת הצמיחה האקספוננציאלית של הגברה של PCR ארוכה יותר, עקומה 'בצורת S' טיפוסית יותר, כך ערך אות הקרינה גבוה יותר, וכך מתאים יותר לזיהוי Multiplex PCR.פולימראזות מותג DNA עם כוח אנזימטי חלש יכולים בדרך כלל לתמוך רק בתגובות דו-מפלסיות.כאשר עושים תגובות 3-פלקס, עקומת ההגברה נמוכה, ערך אות הקרינה נמוך, ואין עקומת הגברה אופיינית, כך שקשה לשפוט את התוצאות.

3. בחר אנזים Taq להתחלה חמה עם רגישות גבוהה

באופן כללי, ל-DNA פולימראז יש יעילות הגברה גבוהה ורגישות גבוהה, אך יש גם חוסר עקביות.אם שפע גן המטרה של הדגימה להגברה נמוכה, מומלץ לבדוק את רגישות ההגברה של אנזים Taq.שיטת הזיהוי הנפוצה ביותר היא ביצוע דילול גרדיאנט פי 10 או פי 5 של שבר הפלסמיד של גן המטרה, ביצוע זיהוי PCR בדילול התחתון, ובחירה באנזים Taq עם התחלה חמה עם רגישות זיהוי גבוהה יותר.

ניתן לראות מהאמור לעיל שחוקרים צריכים לבחור לפי דרישות הניסוי שלהם ותנאי המימון שלהם.עדיף לעשות ניסוי הגברה בדילול גרדיאנט כדי לזהות את יעילות ההגברה והרגישות של האנזים Taq עם התחלה חמה.

דוגמה של Foregene's Taq DNA Polymerase:

Foreasy HS Taq DNA Polymerase

תיאור

Foreasy HS Taq DNA Polymerase הוא פולימראז DNA המתבטא בחיידקים הנדסיים Escherichia coli על ידי טכנולוגיית רקומבינציה של גנים.האנזים משולב עם buffffer תגובה ייחודי, מה שהופך את המוצר לעמיד ותואם במיוחד, ויכול להשתמש ישירות בליזאט הדגימה (מערכת Foregene Lysis) כתבנית לתגובות זיהוי.

יישום

זיהוי PCR איכותי וכמותי של תבניות מטוהרות ותבניות לא מטוהרות.

בקרת איכות

1. לא זוהתה פעילות נוקליאז אקסוגנית

שיטת 2.PCR לזיהוי שיורי DNA גנומי ללא מארח

3. זה יכול להגביר ביעילות גנים בעותק בודד בגנום האנושי

4. אחסן בטמפרטורת החדר למשך שבוע, ללא שינויים ברורים בפעילות

פרטי המוצר: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/