בניית מערכת SOP

קבע את SOP לניסוי PCR לסטנדרטיזציה של ההתנהגות של אנשי הניסוי.

הנסיינים מקפידים על נהלי ההפעלה, וממזערים את זיהום ה-PCR שעלול להיגרם מגורמים אנושיים או למנוע התרחשות של זיהום במבצע.כמו כן, על הנסיין להיות בעל ידע ומיומנויות מקצועיות מתאימים, לרבות מיומנות בהפעלת ציוד נלווה, הבהרת כל תהליך העבודה, שליטה בשיטות הטיפול של זיהום ושיטות בקרת איכות מעבדה, ויכולת לפרש נכון את תוצאות הבדיקה.

בניית מעבדת PCR סטנדרטית

מעבדת ה-PCR מחולקת לארבעה תחומים באופן עקרוני, כלומר אזור הכנת ריאגנטים, אזור עיבוד דגימות, אזור הגברה ואזור ניתוח מוצרי הגברה.שני האזורים הראשונים הם אזורי פרה-הגברה, ושני האזורים האחרונים הם אזורי פוסט-הגברה.יש להפריד בקפדנות בין אזור קדם ההגברה לבין אזור פוסט ההגברה.חומרי ניסוי, ריאגנטים, נייר רישום, עטים, חומרי ניקוי וכו' יכולים לזרום רק מאזור קדם ההגברה לאזור שלאחר ההגברה, כלומר מאזור הכנת הריאגנטים, אזור עיבוד הדגימה, אזור ההגברה ומאזור ניתוח מוצרי ההגברה, ואסור להם לזרום בכיוון ההפוך.זרימת האוויר במעבדה צריכה לזרום גם מאזור קדם ההגברה לאזור שלאחר ההגברה, ולא בכיוון ההפוך.

צמצם את צעדי הניסוי

אם המעבדה מבצעת רק איתור וזיהוי PCR, מומלץ להשתמש ב-PCR כמותי פלואורסצנטי במקום PCR קונבנציונלי.

ניתן לאסוף ולנתח תוצאות זיהוי PCR כמותיות באמצעות אותות פלואורסצנטי, כך שאין צורך לפתוח את המכסה לאלקטרופורזה לאחר התגובה, מה שמונע זיהום של מוצרי PCR הנגרם על ידי דליפה של תוצרי תגובה ליצירת אירוסולים.אם תגדיל את מספר פתחי המכסה במהלך שלב הטעינה של אלקטרופורזה בג'ל, סביר להניח שיתרחש זיהום אירוסול.מומלץ לקדם את היישום של PCR כמותי ולהחליף בהדרגה את ה-PCR האיכותי.

אמץ מערכת נגד זיהום UNG

מערכת UNG anti-PCR זיהום המוצר משמשת לתגובת PCR.

המערכת משתמשת ב-dUTP במקום dTTP.לאחר תגובת ה-PCR, כל מוצרי PCR (שברי DNA) משולבים עם dUTP;בסבב הבא של תגובת PCR, האנזים UNG שנוסף למערכת מודגרת ב-37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות לפני PCR, אשר יכול להיות ספציפי לפרק את כל שברי ה-DNA המכילים dUTP, ולאחר מכן לבצע תגובת PCR.זה יכול להסיר לחלוטין את זיהום האירוסול הנגרם על ידי מוצרי PCR.ההשפעה מוצגת באיור שלהלן:

הערה: לסדרת PCR ישירה, ניתן לבחור את מוצרי הסדרה של מערכת זיהום המוצר נגד PCR של FJ Biotech

לְהַצִיעַ

עבור מעבדות המבצעות בדיקות גנוטיפ בקנה מידה גדול, מומלץ מאוד להשתמש במערכת זיהום מוצר UNG anti-PCR לבדיקת ריאגנטים בנוסף לבניית מעבדות סבירות.

תזכורת: השימוש במערכת זו אינו יכול להסיר את זיהום מוצר ה-PCR שכבר נגרם.לכן, יש להשתמש במערכת UNG בתחילת הבדיקה הרלוונטית, ותמיד יש להשתמש במערכת UNG להגברת PCR, על מנת למנוע זיהום של מוצרי PCR.חיובי כוזב.

מומלץ להשתמש במערכת Direct PCR-UNG של Forge Biotech בעת ביצוע בדיקות בקנה מידה גדול, כגון: Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；

ערכת PCR ישירה של זרעי צמח-UNG；

ערכת PCR ישירה של רקמות בעלי חיים-UNG；

Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；

Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.

סדרת ערכות זו מבית Foregene יכולה לא רק לבצע זיהוי PCR במהירות ובקנה מידה גדול, אלא גם למנוע ולשלוט ביעילות בזיהום מוצר PCR.