קבע את SOP לניסוי PCR לסטנדרטיזציה של ההתנהגות של אנשי הניסוי.
הנסיין מקפיד על נהלי ההפעלה, וממזער את זיהום ה-PCR שעלול להיגרם מגורמים אנושיים או מונע התרחשות של זיהום.כמו כן, על הנסיין להיות בעל ידע ומיומנויות מקצועיות מתאימים, לרבות מיומנות בהפעלת ציוד נלווה, הבהרת כל תהליך העבודה, שליטה בשיטות הטיפול של זיהום ושיטות בקרת איכות מעבדה, ויכולת לפרש נכון את תוצאות הבדיקה.
הקמת מעבדת PCR סטנדרטית.
מעבדת PCR מחולקת לארבעה אזורים באופן עקרוני, כלומר אזור הכנת ריאגנטים, אזור עיבוד דגימות, אזור הגברה ואזור ניתוח מוצרי הגברה.שני האזורים הראשונים הם אזורי פרה-הגברה, ושני האזורים האחרונים הם אזורי פוסט-הגברה.יש להפריד בקפדנות בין אזור קדם ההגברה לבין אזור פוסט ההגברה.חומרי ניסוי, ריאגנטים, נייר רישום, עטים, חומרי ניקוי וכו' יכולים לזרום רק מאזור קדם ההגברה לאזור שלאחר ההגברה, כלומר מאזור הכנת הריאגנטים → אזור עיבוד הדגימה → אזור ההגברה → אזור ניתוח מוצרי ההגברה, ואסור לזרום לאחור.זרימת האוויר במעבדה צריכה לזרום גם מאזור קדם ההגברה לאזור שלאחר ההגברה, ולא לזרום לאחור.עיצוב מעבדת PCR האידיאלי מוצג להלן:
איור א': מצב הגדרת מעבדת PCR אידיאלי עם לחץ שלילי בחדר המאגר
איור ב': מצב הגדרת מעבדת PCR אידיאלי עם לחץ חיובי בחדר המאגר
דיאגרמות ההתקנה של מעבדת PCR הניתנות באיור A ובאיור B אמורות להיות מצב הגדרה אידיאלי יותר, והמעבדה עם התנאים יכולה להתייחס למצב זה לתכנון.למעבדות רגילות, מומלץ להפריד את אזור הגברה של ה-PCR ואזור ניתוח המוצר, ולצמצם ככל האפשר את פתח הכיסוי באזור הכנת הדגימה ובאזור הגברה של PCR.זכור: חל איסור מוחלט לקחת מוצרים ואספקה ניסיונית באזור ניתוח המוצר לאזור הכנת הדגימה ולאזור הגברה של PCR.
אם המעבדה מבצעת רק איתור וזיהוי PCR, מומלץ להשתמש ב-PCR כמותי פלואורסצנטי במקום PCR קונבנציונלי.
ניתן לאסוף ולנתח תוצאות זיהוי PCR כמותיות באמצעות אותות פלואורסצנציה, כך שאין צורך לפתוח את המכסה לאלקטרופורזה לאחר התגובה, מה שנמנע מזיהום תוצר ה-PCR הנגרם כתוצאה מדליפת תוצרי תגובה ליצירת אירוסולים.אם תגדיל את מספר פתחי המכסה במהלך שלב הטעינה של אלקטרופורזה בג'ל, סביר להניח שיתרחש זיהום אירוסול.מומלץ לקדם את היישום של PCR כמותי ולהחליף בהדרגה את ה-PCR האיכותי.
מערכת UNG anti-PCR זיהום המוצר משמשת לתגובת PCR.
המערכת משתמשת ב-dUTP במקום dTTP.לאחר תגובת ה-PCR, כל מוצרי PCR (שברי DNA) משולבים עם dUTP;בסבב הבא של תגובת ה-PCR, האנזים UNG שנוסף למערכת מודגרת ב-37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות לפני ה-PCR, מה שיכול לפרק באופן ספציפי את כל שברי ה-DNA המכילים dUTP, ולאחר מכן לבצע תגובת PCR.זה יכול להסיר לחלוטין את זיהום האירוסול הנגרם על ידי מוצרי PCR.ההשפעה מוצגת באיור שלהלן:
הערה: עבור סדרת PCR ישירה, אתה יכול לבחור את מוצרי הסדרה של מערכת זיהום המוצר נגד PCR של Foregeneלְהַצִיעַ
עבור מעבדות המבצעות בדיקות גנוטיפ בקנה מידה גדול, מומלץ מאוד להשתמש במערכת זיהום מוצר UNG anti-PCR לבדיקת ריאגנטים בנוסף לבניית מעבדות סבירות.
תזכורת: השימוש במערכת זו אינו יכול להסיר את זיהום מוצר ה-PCR שכבר נגרם.לכן, יש להשתמש במערכת UNG בתחילת הבדיקה הרלוונטית, ולהשתמש במערכת UNG להגברת PCR, על מנת למנוע זיהום של מוצרי PCR False positive.
מומלץ להשתמש במערכת Direct PCR-UNG של Foregene בעת ביצוע בדיקות בקנה מידה גדול, כגון:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
ערכת PCR ישירה של זרעי צמח-UNG；
ערכת PCR ישירה של רקמות בעלי חיים-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
סדרת ערכות זו מבית Foregeneיכול לא רק לבצע זיהוי PCR במהירות ובקנה מידה גדול, אלא גם למנוע ולשלוט ביעילות בזיהום מוצר PCR.
זמן פרסום: 19 במרץ 2021
