הניתוח הבא של בעיות אפשריות בבוקלסְפוֹגִית/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.
עמוד הטיהור סתום
בערכה זו, בפעולת מיצוי ה-DNA הגנומי, עמודת הטיהור נספגת ישירות על תערובת התמוגה האנזימטית של הדגימה ללא שלב צנטריפוגה, ועמודת הטיהור עלולה להיחסם עקב אנזיזציה לא מלאה וצמיגות גבוהה של הדגימה.
הגורמים האפשריים הבאים הם כדלקמן:
1. עיכול אנזימטי לא שלם של דגימות רקמה.
המלצה: ניתן להאריך כראוי את זמן עיבוד הדגימה של Foregene Protease או שניתן לקחת את הסופרנטנט לאחר צנטריפוגה ב-12,000 סל"ד (~13,400× ז) למשך 5 דקות.
2. שימוש מופרז בדגימות רקמה או רקמות גדולות.
המלצה: עדיף לא לחרוג מ-1בוקל ספוגית בדגימה;אם המדגם גדול מדי, הגדל את המינון של Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 בהתאם.
3. צמיגות המדגם גבוהה מדי.
המלצה: ניתן לדלל דגימות כראוי עם 10 מ"מ של Tris-HCl לפני מיצוי DNA גנומי.
4. שברי כרטיס הדם נשאבו.
המלצה: ניתן להאריך כראוי את זמן הצנטריפוגה החולף של שלב 6 של מיצוי גנומי של כתמי דם (כרטיס FTA).
תשואה נמוכה או ללא DNA
לעתים קרובות ישנם מגוון גורמים המשפיעים על תפוקת ה-DNA הגנומי, כולל מקור הדגימה, תנאי אחסון הדגימה, הכנת הדגימה, מניפולציה וכו'.
לא ניתן להשיג DNA גנומי במהלך מיצוי
הגורמים האפשריים הם כדלקמן:
1. שימור לא נכון של דגימות או אחסון לאורך זמן מוביל לפירוק DNA גנומי.
המלצה: רצוי לדגום ספוגיות אוראלי טריות, ולא כדאי להשתמש בספוגיות משומרות לפעולות מיצוי DNA גנומי;דגימות כתמי דם צריכות להבטיח שהאיכות מוסמכת ושזמן האחסון לא צריך להיות ארוך מדי.
2. שימוש מועט מדי ברקמות עלול לגרום ללא מיצוי של ה-DNA הגנומי המתאים.
המלצה: עקוב אחר הbuccaלשטוף הוראות דגימה במדריך ההפעלה, ולנגב כמה שיותר פעמים כדי שניתן יהיה לחבר מספיק תאים לספוגית הפה לצורך מיצוי DNA גנומי;עבור מיצוי דגימת כתמי דם, ניתן להגדיל את אזור חיתוך כתמי הדם בצורה מתאימה.
3. Foregene Protease נשמר בצורה לא נכונה, וכתוצאה מכך ירידה בפעילותו או חוסר הפעלה שלו.
המלצה: אשר את תנאי האחסון שלה-Foregene Protease או להחליף אותו ב-Foregene Protease חדש לתגובה אנזימטית.
4. שימור לא נכון של הערכה או זמן האחסון ארוך מדי, וכתוצאה מכך כשל של חלק מהרכיבים בערכה.
המלצה: לרכוש חדשבוקל ספוג DNAבידוד ערכה להליכים קשורים.
5. Buffer WB אינו מוסיף אתנול מוחלט.
המלצה: אשר שחוצץ WB מוסיף את הנפח הנכון של אתנול מוחלט.
6. המסיר לא הוסיפו כראוי לסרט הסיליקון.
המלצה: הוסף 65מעלות צלזיוסחומר eluent שחומם מראש יורד לאמצע קרום הסיליקון והשאיר בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להגביר את יעילות הפליטה.
Lדנ"א גנומי בעל תשואה גבוהה מְבוּדָד
הגורמים האפשריים הבאים הם כדלקמן:
1. שימור לא נכון של דגימות או אחסון לאורך זמן מוביל לפירוק DNA גנומי.
המלצה: רצוי לדגום ספוגיות אוראלי טריות, ואין להשתמש בספוגיות משומרות למיצוי DNA גנומי.
2. אם כמות דגימת הרקמה קטנה מדי, תכולת ה-DNA הגנומית המופקת תהיה קטנה יותר.
המלצה: עקוב אחר הוראות דגימת ספוגית הפה במדריך ההפעלה, ניגוב כמה שיותר פעמים כדי שניתן יהיה לחבר מספיק תאים לספוגית הפה לצורך מיצוי DNA גנומי.
3. Foregene Protease נשמר בצורה לא נכונה, וכתוצאה מכך ירידה בפעילותו או חוסר הפעלה שלו.
המלצה: אשר את תנאי האחסון שלthe Foregene Protease או להחליף אותו בחדש Foregene Protease לתגובה אנזימטית.
4. בעיות סלק.
המלצה: השתמש במאגר EB לאלוציה;אם משתמשים ב-ddH2O או eluents אחרים, אשר כי ה-pH של eluate הוא בין 7.0-8.5.
5. ה-eluate לא הוסף בצורה נכונה טיפה.
המלצה: הוסף טיפות eluent לאמצע קרום הסיליקון והשאיר בטמפרטורת החדר למשך 5 דקות כדי להגביר את יעילות הפליטה.
6. נוזל הפליטה מצטבר מעט מדי.
המלצה: השתמש בחומר eluent עבור eluent DNA גנומי כנדרש בהוראות, לפחותלא פחות יותר מ-15μl.
Lאוי טוהר of DNA גנומימְבוּדָד
טוהר DNA גנומי נמוך יכול להוביל לכישלון או לתוצאות לא מספקות של ניסויים במורד הזרם, כגון: לא ניתן לחתוך אנזימים, PCR לא יכול לקבל את קטע הגן המעניין וכו'.
הגורמים האפשריים הם כדלקמן:
1. זיהום הטרופרוטאינים, זיהום RNA.
ניתוח: עמודת הטיהור לא נשטפה באמצעות Buffer PW;עמודת טיהור שטיפת Buffer PW לא נשטפה במהירות הצנטריפוגלית הנכונה.
המלצה: ודא שאין משקעים בסופרנטנט לפני הוספת אתנול;הקפד לשטוף את עמודת הטיהור לפי ההוראות, ולא ניתן לוותר על שלב זה.
2. זיהום יונים טומאה.
ניתוח: עמודת טיהור שטיפת חוצץ WB הושמטה או נשטפה רק פעם אחת, וכתוצאה מכך זיהום יוני שיורי.
המלצה: הקפד לשטוף את Buffer WB 2 פעמים לפי ההוראות כדי להסיר שאריות יונים ככל האפשר.
3. זיהום אנזים RNA.
ניתוח: RNases זרים נוספו למאגר;פעולת השטיפה של Buffer PW הייתה שגויה, וכתוצאה מכך שאריות RNase השפיעו על פעולות ניסוי של RNA במורד הזרם, כגון שעתוק חוץ גופית.
המלצה: חומצת גרעין מסדרת Foregeneאיזולהערכות tion יכולות להסיר RNA ללא תוספת נוספת של RNase,לכן ערכת בידוד DNA של ספוגית חזה/FTA כרטיסנחוץ't הוסף RNase;הקפד לעקוב אחר ההוראות עבור עמודת טיהור כביסה Buffer PW, ולא ניתן לוותר על שלב זה.
4. שאריות אתנול.
ניתוח: Buffer WB לא ביצע צנטריפוגה של צינור ריק לאחר שטיפת עמודת הטיהור.
המלצה: בצע את פעולת הצנטריפוגה הנכונה של צינור ריק בהתאם להוראות.
5. זיהום טומאה אחר.
ניתוח: דגימות שמורות או דגימות מיוחדות אינן מטופלות מראש.
המלצה: טפל היטב את הדגימה לפי ההוראות.
זמן פרסום: 18-3-2022
