W: אחי, השעתוק ההפוך הושלם, ולבסוף השלב האחרון - PCR כמותי פלואורסצנטי!היי, אחי, מה זה PCR כמותי בזמן אמת?
M:PCR אתה תמיד יודע, נכון?
W: אתה יודע, PCR הוא תגובת שרשרת הפולימראז, וזו טכנולוגיה שמגבירה DNA!
M: זה כמעט... זוהי שיטה טכנית להגביר את רצף המטרה ליותר ממיליון פעמים באמצעות פריימרים ספציפיים, אבל זה רק מצביע על נוכחות או היעדר של רצף המטרה, ואינו יכול לקבוע את כמות התבנית הראשונית.PCR כמותי פלואורסצנטי היא שיטה טכנית שפותחה כדי לפתור בעיה זו.PCR בזמן אמת וכמות PCR (qPCR) מתייחסים אליו בדרך כלל.
W: ההבדל מ-PCR רגיל טמון בכימות הקרינה?
M:כן, כלומר, בשלב ההארכה של כל מחזור PCR, מזוהה עוצמת אות הקרינה, וניתן לחשב את כמות התבנית הראשונית בהתאם לשינוי בעוצמת האות.
W: זה מרגיש כל כך מסובך!האם אני צריך לחשב את זה לבד?
מ: זה מחייב אותך ללמוד לאט, עדיף להיות מסוגל להבין את העיקרון.כעת ניתן להתמקד תחילה בערך ה-CT, שהוא נתוני ניסוי אינטואיטיביים יחסית, וגודלו מתאים לגודל כמות התבנית הראשונית.ישנם גם גרפים כגון עקומות הגברה ועקומות התכה.יש להם את המילה האחרונה אם הניסוי שלך מצליח או לא.
W: אה, אחי.אז אני הולך לעשות את ניסוי ה-qPCR!
M: שימו לב במיוחד לא להוסיף תבניות לאזור המגיב, אחרת התערובת הלא בשימוש שלכם תזוהם בקלות!
W: הבנתי!

זמן אמת PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

יעילות גבוהה יותר, ספציפיות רבה יותר
רגישות גבוהה, תאימות טובה